| 摘要 | 第11-15页 |
| Abstract | 第15-19页 |
| 1 前言 | 第20-32页 |
| 1.1 乳脂肪合成机理 | 第20-23页 |
| 1.1.1 乳脂肪的组成 | 第20页 |
| 1.1.2 乳脂肪酸的组成 | 第20页 |
| 1.1.3 乳脂肪酸的来源 | 第20页 |
| 1.1.4 乳脂肪合成代谢途径 | 第20-23页 |
| 1.2 乳脂肪降低理论 | 第23-25页 |
| 1.2.1 葡萄糖生成-胰岛素理论 | 第24页 |
| 1.2.2 反式脂肪酸理论 | 第24页 |
| 1.2.3 生物氢化作用理论 | 第24-25页 |
| 1.3. 脂肪合成的转录因子 | 第25-29页 |
| 1.3.1 固醇调节元件结合蛋白 | 第25-26页 |
| 1.3.2 过氧化物酶体增殖物激活受体 | 第26-27页 |
| 1.3.3 肝脏X受体 | 第27-28页 |
| 1.3.4 乳脂肪合成的转录因子 | 第28-29页 |
| 1.4 脂肪酸对乳脂肪合成的调节 | 第29-30页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第30-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-49页 |
| 2.1 实验试剂和仪器 | 第32-33页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第32页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第32-33页 |
| 2.2 奶牛乳腺组织乳脂肪合成相关基因和蛋白表达检测 | 第33-37页 |
| 2.2.1 实验动物选取 | 第33页 |
| 2.2.2 奶牛乳腺组织收集及总RNA提取 | 第33-34页 |
| 2.2.3 qRT-PCR检测乳脂肪合成相关基因表达 | 第34-36页 |
| 2.2.4 Western blotting检测乳脂肪合成转录调控因子和相关蛋白表达 | 第36-37页 |
| 2.3 奶牛乳腺上皮细胞(DCMECs)的原代培养及鉴定 | 第37-38页 |
| 2.3.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养及纯化 | 第37-38页 |
| 2.3.2 奶牛乳腺上皮细胞的鉴定 | 第38页 |
| 2.4 脂肪酸对DCMECs乳脂肪合成影响的检测 | 第38-41页 |
| 2.4.1 脂肪酸的最佳作用浓度筛选 | 第38-39页 |
| 2.4.2 脂肪酸作用DCMECs后乳脂肪合成相关基因表达的检测 | 第39-40页 |
| 2.4.3 脂肪酸作用DCMECs后乳脂肪合成转录因子及相关蛋白表达的检测 | 第40页 |
| 2.4.4 脂肪酸作用DCMECs后乳脂肪合成关键酶活性的检测 | 第40-41页 |
| 2.5 细胞免疫荧光法进行乳脂肪合成关键转录因子PPARγ定位分析 | 第41页 |
| 2.6 脂肪酸添加对PPARγ基因沉寂DCMECs乳脂肪合成影响的检测 | 第41-43页 |
| 2.6.1 脂肪酸的最佳作用浓度筛选 | 第41-42页 |
| 2.6.2 乳脂肪合成相关基因表达的检测 | 第42页 |
| 2.6.3 乳脂肪合成转录因子表达的检测 | 第42页 |
| 2.6.4 乳脂肪合成关键酶活性的检测 | 第42-43页 |
| 2.7 脂肪酸添加对PPARγ基因超表达DCMECs乳脂肪合成影响的检测 | 第43-48页 |
| 2.7.1 引物设计及PPARγ基因扩增 | 第43-44页 |
| 2.7.2 PPARγ基因PCR扩增产物克隆载体构建 | 第44-45页 |
| 2.7.3 真核表达载体pGCMV/IRES/EGFP/PPARγ的构建 | 第45-46页 |
| 2.7.4 脂肪酸的最佳作用浓度筛选 | 第46-47页 |
| 2.7.5 乳脂肪合成相关基因表达的检测 | 第47页 |
| 2.7.6 乳脂肪合成转录因子表达的检测 | 第47-48页 |
| 2.7.7 乳脂肪合成关键酶活性的检测 | 第48页 |
| 2.8 数据处理 | 第48-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-120页 |
| 3.1 奶牛乳腺组织乳脂肪合成相关基因和相关蛋白表达检测结果 | 第49-51页 |
| 3.1.1 奶牛乳腺组织乳脂肪合成相关基因表达结果 | 第49-50页 |
| 3.1.2 奶牛乳腺组织乳脂肪合成转录调控因子和相关蛋白表达结果 | 第50-51页 |
| 3.2 奶牛乳腺上皮细胞原代培养及鉴定 | 第51-52页 |
| 3.3 脂肪酸对DCMECs乳脂肪合成影响的检测结果 | 第52-69页 |
| 3.3.1 乙酸钠对DCMECs乳脂肪合成影响的检测结果 | 第52-56页 |
| 3.3.2 β-羟基丁酸钠对DCMECs乳脂肪合成影响的检测结果 | 第56-59页 |
| 3.3.3 乙酸钠和β-羟基丁酸钠协同作用对DCMECs乳脂肪合成影响的检测结果 | 第59-63页 |
| 3.3.4 软脂酸对DCMECs乳脂肪合成影响的检测结果 | 第63-66页 |
| 3.3.5 硬脂酸对DCMECs乳脂肪合成影响的检测结果 | 第66-69页 |
| 3.4 乳脂肪合成关键转录因子PPARγ定位分析 | 第69页 |
| 3.5 脂肪酸对PPARγ基因沉寂DCMECs乳脂肪合成影响的检测结果 | 第69-93页 |
| 3.5.1 PPARγ RNA沉寂效率 | 第69-70页 |
| 3.5.2 乙酸钠对PPARγ基因沉寂DCMECs乳脂肪合成影响的检测结果 | 第70-74页 |
| 3.5.3 β-羟基丁酸钠对PPARγ基因沉寂DCMECs乳脂肪合成影响的检测结果 | 第74-79页 |
| 3.5.4 乙酸钠和β-羟基丁酸钠协同作用对PPARγ基因沉寂DCMECs乳脂肪合成影响的检测结果 | 第79-84页 |
| 3.5.5 软脂酸对PPARγ基因沉寂DCMECs乳脂肪合成影响的检测结果 | 第84-88页 |
| 3.5.6 硬脂酸对PPARγ基因沉寂DCMECs乳脂肪合成影响的检测结果 | 第88-93页 |
| 3.6 脂肪酸对PPARγ基因超表达DCMECs乳脂肪合成影响的检测结果 | 第93-118页 |
| 3.6.1 PPARγ的PCR扩增结果及重组质粒pGCMV/IRES/EGFP/PPARγ的验证 | 第93-94页 |
| 3.6.2 PPARγ超表达效率 | 第94页 |
| 3.6.3 乙酸钠对PPARγ基因超表达DCMECs乳脂肪合成影响的检测结果 | 第94-99页 |
| 3.6.4 β-羟基丁酸钠对PPARγ基因超表达DCMECs乳脂肪合成影响的检测结果 | 第99-104页 |
| 3.6.5 乙酸钠和β-羟基丁酸钠协同作用对PPARγ基因超表达DCMECs乳脂肪合成影响的检测结果 | 第104-109页 |
| 3.6.6 软脂酸对PPARγ基因超表达DCMECs乳脂肪合成影响的检测结果 | 第109-114页 |
| 3.6.7 硬脂酸对PPARγ基因超表达DCMECs乳脂肪合成影响的检测结果 | 第114-118页 |
| 3.7 脂肪酸与PPARγ基因互作对DCMECs乳脂肪合成的调节作用示意图 | 第118-120页 |
| 4 讨论 | 第120-135页 |
| 4.1 不同泌乳质量奶牛乳腺组织乳脂肪合成相关基因表达和蛋白表达分析 | 第120-121页 |
| 4.2 脂肪酸对DCMECs乳脂肪合成的影响 | 第121-127页 |
| 4.2.1 乙酸钠对DCMECs乳脂肪合成的影响 | 第121-122页 |
| 4.2.2 β-羟基丁酸钠对DCMECs乳脂肪合成的影响 | 第122-123页 |
| 4.2.3 乙酸钠和β-羟基丁酸钠协同作用对DCMECs乳脂肪合成的影响 | 第123-124页 |
| 4.2.4 软脂酸对DCMECs乳脂肪合成的影响 | 第124-125页 |
| 4.2.5 硬脂酸对DCMECs乳脂肪合成的影响 | 第125-126页 |
| 4.2.6 脂肪酸对DCMECs乳脂肪合成相关基因表达的调节作用 | 第126-127页 |
| 4.3 PPARγ细胞内定位分析 | 第127页 |
| 4.4 PPARγ基因沉寂和超表达对DCMECs乳脂肪合成的影响 | 第127-129页 |
| 4.4.1 PPARγ基因沉寂对DCMECs乳脂肪合成的影响 | 第127-128页 |
| 4.4.2 PPARγ基因超表达对DCMECs乳脂肪合成的影响 | 第128-129页 |
| 4.5 脂肪酸对PPARγ基因沉寂和超表达DCMECs乳脂肪合成的影响 | 第129-135页 |
| 4.5.1 乙酸钠对PPARγ基因沉寂和超表达DCMECs乳脂肪合成的影响 | 第129-130页 |
| 4.5.2 β-羟基丁酸钠对PPARγ基因沉寂和超表达DCMECs乳脂肪合成的影响 | 第130-131页 |
| 4.5.3 乙酸钠和β-羟基丁酸钠协同作用对PPARγ基因沉寂和超表达DCMECs乳脂肪合成的影响 | 第131-132页 |
| 4.5.4 软脂酸对PPARγ基因沉寂和超表达DCMECs乳脂肪合成的影响 | 第132-133页 |
| 4.5.5 硬脂酸对PPARγ基因沉寂和超表达DCMECs乳脂肪合成的影响 | 第133-135页 |
| 5 结论 | 第135-136页 |
| 致谢 | 第136-137页 |
| 参考文献 | 第137-149页 |
| 附录 | 第149-150页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第150页 |
