| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-36页 |
| 1 植物定量蛋白质组学分析策略与方法 | 第16-23页 |
| 1.1 全长蛋白的定量分析方法 | 第17-18页 |
| 1.1.1 凝胶电泳定量分析法 | 第17-18页 |
| 1.1.2 质谱定量分析法 | 第18页 |
| 1.2 基于MS的非标记的定量分析方法 | 第18页 |
| 1.3 基于化学同位素标记的蛋白质组学定量分析方法 | 第18-20页 |
| 1.3.1 同位素标记的亲和标签(ICAT)和同位素标记的蛋白标签(ICPL) | 第19页 |
| 1.3.2 TMT and iTRAQ | 第19-20页 |
| 1.3.3 ~(18)0 标记 | 第20页 |
| 1.3.4 其它化学标签 | 第20页 |
| 1.4 代谢标记技术 | 第20-22页 |
| 1.4.1 细胞培养稳定同位素标记技术 | 第21页 |
| 1.4.2 同位素标记盐体内代谢标记技术 | 第21-22页 |
| 1.5 基于MS的对靶蛋白的绝对定量 | 第22-23页 |
| 2 水稻蛋白质组学研究进展 | 第23-32页 |
| 2.1 水稻“Ⅰ期”蛋白质组学 | 第24-30页 |
| 2.1.1 水稻愈伤分化蛋白质组学 | 第24页 |
| 2.1.2 水稻叶蛋白质组学 | 第24-25页 |
| 2.1.3 水稻叶鞘蛋白质组学 | 第25页 |
| 2.1.4 水稻质膜(PM)蛋白质组学 | 第25-26页 |
| 2.1.5 水稻根蛋白质组学 | 第26-28页 |
| 2.1.6 水稻种子蛋白质组学 | 第28-29页 |
| 2.1.7 水稻细胞器蛋白质组学 | 第29-30页 |
| 2.2 水稻“Ⅱ期”蛋白质组学 | 第30-32页 |
| 2.2.1 互作蛋白质组学 | 第30页 |
| 2.2.2 分泌蛋白质组学 | 第30-31页 |
| 2.2.3 转录后修饰(PTMs)蛋白质组学 | 第31-32页 |
| 3 植物铝毒害及其耐铝机制 | 第32-33页 |
| 3.1 植物铝毒害 | 第32-33页 |
| 3.2 植物耐铝毒机制 | 第33页 |
| 4 水稻耐铝机制研究进展 | 第33-34页 |
| 5 翻译调控瘤蛋白研究进展 | 第34-35页 |
| 6 研究目的及意义 | 第35-36页 |
| 第二章 水稻应答铝毒害的根蛋白质组学研究 | 第36-67页 |
| 1 材料与方法 | 第36-41页 |
| 1.1 材料 | 第36页 |
| 1.2 水稻铝处理 | 第36-37页 |
| 1.2.1 水稻材料培养 | 第36-37页 |
| 1.2.2 氯化铝处理 | 第37页 |
| 1.3 根系相对伸长量测定 | 第37页 |
| 1.4 水稻根蛋白的提取和纯化 | 第37页 |
| 1.5 iTRAQ标记和质谱分析 | 第37-39页 |
| 1.5.1 蛋白样品的前处理 | 第37页 |
| 1.5.2 iTRAQ试剂标记酶解肽段 | 第37-38页 |
| 1.5.3 强阳离子交换色谱 | 第38页 |
| 1.5.4 On-line Nano-LC ESI QqTOF质谱分析 | 第38-39页 |
| 1.6 数据分析 | 第39页 |
| 1.6.1 质谱数据分析 | 第39页 |
| 1.6.2 蛋白质的分类 | 第39页 |
| 1.7 KOBAS分析铝响应的代谢途径 | 第39-40页 |
| 1.8 qPCR | 第40-41页 |
| 1.8.1 水稻根总RNA的提取 | 第40页 |
| 1.8.2 cDNA第一链的合成 | 第40页 |
| 1.8.3 qPCR | 第40-41页 |
| 1.9 蔗糖含量的测定 | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-57页 |
| 2.1 两种水稻铝耐性分析 | 第41-42页 |
| 2.2 水稻受Al~(3+)迫前后根蛋白iTRAQ分析 | 第42-44页 |
| 2.3 iTRAQ定量信息的获取 | 第44-53页 |
| 2.4 受铝离子处理后差异表达的蛋白质 | 第53页 |
| 2.5 铝胁迫应答反应中显著上调的生化途径 | 第53-54页 |
| 2.6 iTRAQ数据的qPCR验证 | 第54-57页 |
| 3 讨论 | 第57-66页 |
| 3.1 iTRAQ技术在定量蛋白质组研究中的优越性 | 第57页 |
| 3.2 水稻根铝响应的蛋白质 | 第57-66页 |
| 3.2.1 能量相关蛋白 | 第57-61页 |
| 3.2.2 胁迫和防御相关蛋白 | 第61-62页 |
| 3.2.3 蛋白动态平衡相关蛋白 | 第62-63页 |
| 3.2.4 代谢相关蛋白 | 第63页 |
| 3.2.5 信号转导和转运相关蛋白 | 第63-64页 |
| 3.2.6 细胞结构、转录、细胞生长和分裂相关的蛋白 | 第64-66页 |
| 4 小结与展望 | 第66-67页 |
| 4.1 小结 | 第66页 |
| 4.2 展望 | 第66-67页 |
| 第三章 水稻OsTCTP功能分析 | 第67-96页 |
| 1 材料与方法 | 第67-74页 |
| 1.1 水稻材料 | 第67页 |
| 1.2 菌株 | 第67页 |
| 1.3 基因拷贝数分析 | 第67-68页 |
| 1.3.1 基因组DNA抽提 | 第67页 |
| 1.3.2 DNA的消化、电泳与转移 | 第67-68页 |
| 1.3.3 探针标记与标记效率检测 | 第68页 |
| 1.3.4 DNA杂交、洗膜与显影 | 第68页 |
| 1.4 载体构建 | 第68-69页 |
| 1.4.1 通用载体pCUN1301的构建 | 第68页 |
| 1.4.2 过量表达载体构建 | 第68-69页 |
| 1.4.3 RNAi载体的构建 | 第69页 |
| 1.5 亚细胞定位 | 第69-70页 |
| 1.6 抗体制备 | 第70-72页 |
| 1.6.1 原核表达载体构建 | 第70-71页 |
| 1.6.2 融合蛋白的诱导表达与纯化 | 第71页 |
| 1.6.3 多克隆抗体的制备和效价评定 | 第71-72页 |
| 1.7 水稻遗传转化与鉴定 | 第72-73页 |
| 1.7.1 水稻遗传转化 | 第72页 |
| 1.7.2 PCR鉴定和Southern blot | 第72页 |
| 1.7.3 蛋白质提取和Western blot | 第72-73页 |
| 1.8 水稻ostctp插入突变体的鉴定 | 第73页 |
| 1.9 逆境胁迫和激素处理 | 第73页 |
| 1.10 转基因植株耐汞性实验 | 第73页 |
| 1.11 H_2O_2含量测定和抗氧化酶活性分析 | 第73-74页 |
| 1.12 N-糖基化位点分析 | 第74页 |
| 1.13 OsTCTP系统进化分析和同源模建 | 第74页 |
| 2 结果与分析 | 第74-92页 |
| 2.1 OsTCTP蛋白的诱导表达与抗体制备 | 第74-75页 |
| 2.2 OsTCTP存在可变剪接 | 第75-77页 |
| 2.3 只有OsTCTPa可被翻译 | 第77-79页 |
| 2.4 OsTCTP是典型的翻译调控瘤蛋白 | 第79-82页 |
| 2.5 OsTCTP具翻译水平调控 | 第82-83页 |
| 2.6 OsTCTP表达模式及亚细胞定位 | 第83-85页 |
| 2.7 OsTCTP受Hg、Cu、ABA和H202诱导表达 | 第85-87页 |
| 2.8 OsTCTP过表达和RNAi植株的表型分析 | 第87-90页 |
| 2.9 Hg胁迫下H202含量和抗氧化酶活性变化 | 第90-92页 |
| 3 讨论 | 第92-94页 |
| 3.1 OsTCTP参与了水稻Hg耐性 | 第92-93页 |
| 3.2 OsTCTP不是N-糖蛋白 | 第93-94页 |
| 4 小结与展望 | 第94-96页 |
| 4.1 小结 | 第94-95页 |
| 4.2 展望 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-117页 |
| 附录Ⅰ 在读期间发表或准备投稿的文章 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
