| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 符号说明 | 第12-14页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 第一部分 动态COPD大鼠模型的建立与miRNA表达谱的构建 | 第16-44页 |
| 1 前言 | 第16-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-27页 |
| 2.1 材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第19页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.4 RNA操作用品的处理 | 第20页 |
| 2.1.5 主要试剂配制 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 COPD动态大鼠构建及病理学观察 | 第21-23页 |
| 2.2.2 miRNA表达谱芯片实验 | 第23-25页 |
| 2.2.3 实时荧光定量PCR(Quantitative Real-Time PCR) | 第25-26页 |
| 2.2.4 统计学分析 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-37页 |
| 3.1 动态COPD大鼠模型评价 | 第27-28页 |
| 3.1.1 一般状态 | 第27页 |
| 3.1.2 体重变化 | 第27页 |
| 3.1.3 肺功能检查 | 第27-28页 |
| 3.2 动态COPD大鼠模型肺组织病理学特征 | 第28-31页 |
| 3.2.1 光镜下组织病理切片特征 | 第28-30页 |
| 3.2.2 炎症病理评分 | 第30-31页 |
| 3.3 动态COPD大鼠模型miRNA芯片表达谱 | 第31-35页 |
| 3.3.1 组织样本的总RNA提取及质量鉴定 | 第31-32页 |
| 3.3.2 动态miRNA芯片表达谱构建 | 第32-35页 |
| 3.4 芯片结果验证 | 第35-37页 |
| 4 讨论 | 第37-42页 |
| 4.1 动态COPD大鼠模型的构建 | 第37-38页 |
| 4.2 动态COPD大鼠模型miRNA芯片表达谱 | 第38-40页 |
| 4.3 miRNA芯片数据验证 | 第40-42页 |
| 5 结论 | 第42-44页 |
| 第二部分 COPD动态miRNA表达谱的生物信息学研究 | 第44-72页 |
| 1 前言 | 第44-46页 |
| 2 材料和方法 | 第46-49页 |
| 2.1 材料(分析软件及数据库) | 第46页 |
| 2.1.1 聚类分析软件 | 第46页 |
| 2.1.2 靶基因预测 | 第46页 |
| 2.1.3 GO和Pathway分析 | 第46页 |
| 2.2 方法 | 第46-49页 |
| 2.2.1 分层聚类分析 | 第46-47页 |
| 2.2.2 差异表达miRNA splinecluster聚类分析 | 第47页 |
| 2.2.3 差异表达miRNA靶基因预测 | 第47页 |
| 2.2.4 基因本体论(Gene Ontology,GO)富集分析 | 第47-48页 |
| 2.2.5 信号通路(Pathway)分析 | 第48-49页 |
| 3 结果 | 第49-63页 |
| 3.1 分层聚类分析 | 第49-51页 |
| 3.2 差异表达miRNA splinecluster聚类分析 | 第51-55页 |
| 3.3 差异表达miRNA靶基因预测 | 第55-58页 |
| 3.4 基因本体论(Gene Ontology,GO)富集分析 | 第58-61页 |
| 3.5 信号通路(Pathway)分析 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-70页 |
| 4.1 miRNA动态表达谱的聚类分析 | 第63-64页 |
| 4.2 miRNA靶基因预测 | 第64-65页 |
| 4.3 miRNA动态表达谱的GO和Pathway分析 | 第65-70页 |
| 4.3.1 MAPK signaling pathway | 第67-68页 |
| 4.3.2 TGF-beta signaling pathway | 第68页 |
| 4.3.3 Cytokine-cytokine receptor interaction | 第68-69页 |
| 4.3.4 Wnt signaling pathway | 第69-70页 |
| 5 结论 | 第70-72页 |
| 第三部分 COPD患者血清miRNA分子标志物的筛选与鉴定 | 第72-92页 |
| 1 前言 | 第72-75页 |
| 2 材料和方法 | 第75-78页 |
| 2.1 材料 | 第75页 |
| 2.1.1 试剂 | 第75页 |
| 2.1.2 仪器 | 第75页 |
| 2.2 方法 | 第75-78页 |
| 2.2.1 研究对象 | 第75-76页 |
| 2.2.2 研究对象人口学特征及肺功能 | 第76页 |
| 2.2.3 血清采集及处理 | 第76页 |
| 2.2.4 血清miRNA提取 | 第76-77页 |
| 2.2.5 候选miRNA筛选 | 第77页 |
| 2.2.6 miRNA逆转录 | 第77页 |
| 2.2.7 实时定量PCR法检测血清miRNA | 第77页 |
| 2.2.8 统计学方法 | 第77-78页 |
| 3 结果 | 第78-86页 |
| 3.1 研究对象人口学和临床特征调查 | 第78页 |
| 3.2 血清miRNA候选分子标志物筛选 | 第78-80页 |
| 3.3 COPD患者外周血清miR-21,miR-181a和miR-146a的表达 | 第80-82页 |
| 3.4 COPD患者外周血清miR-21,miR-181a表达水平与肺功能的关系 | 第82-83页 |
| 3.5 COPD患者血清miR-21,miR-181a的ROC分析 | 第83-86页 |
| 4 讨论 | 第86-91页 |
| 4.1 COPD诊疗现状 | 第86页 |
| 4.2 循环miRNA有望成为多种疾病的分子标志物 | 第86-87页 |
| 4.3 COPD相关血清miRNA的表达 | 第87-88页 |
| 4.4 COPD相关异常表达的血清miRNA作用与意义 | 第88-90页 |
| 4.4.1 miR-21 | 第88-89页 |
| 4.4.2 miR-181a | 第89-90页 |
| 4.5 血清miRNA-21和miR-181a表达水平的ROC分析 | 第90-91页 |
| 5 结论 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-103页 |
| 综述 | 第103-115页 |
| 参考文献 | 第110-115页 |
| 攻读学位期间主要成果 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116页 |
