| 前言 | 第8-16页 |
| 参考文献 | 第11-16页 |
| 中文摘要 | 第16-21页 |
| 英文摘要 | 第21-24页 |
| 第一部分 MiR-126 介导 Spred-1 修复糖尿病内皮祖细胞功能损伤 | 第25-60页 |
| 1 材料 | 第25-29页 |
| 1.1 主要试剂 | 第25-27页 |
| 1.2 主要仪器 | 第27-28页 |
| 1.3 试剂配制 | 第28-29页 |
| 1.4 统计分析软件 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-43页 |
| 2.1 人外周血单个核细胞中内皮祖细胞的分离、培养和鉴定 | 第29-31页 |
| 2.2 Microarray Analysis 技术筛选糖尿病 EPCs 上表达异常的 microRNAs | 第31-34页 |
| 2.3 内皮祖细胞总 RNA 提取、cDNA 合成和定量 PCR | 第34-37页 |
| 2.4 western blot 检测蛋白表达 | 第37-40页 |
| 2.5 miRNA 抑制剂转染 | 第40页 |
| 2.6 质粒构建和慢病毒包装、转染 | 第40-42页 |
| 2.7 细胞增殖和凋亡检测： | 第42页 |
| 2.8 细胞克隆形成和迁移实验 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-54页 |
| 3.1 内皮祖细胞的分离和鉴定 | 第43-45页 |
| 3.2 在糖尿病患者体内表达异常的 microRNAs | 第45-46页 |
| 3.3 miR-126 增加了内皮祖细胞增殖和迁移，克隆形成，抑制细胞凋亡 | 第46-49页 |
| 3.4 miR-126 对内皮祖细胞分化没有影响 | 第49-51页 |
| 3.5 MiR-126 通过 Spred-1 基因调控 EPCs 功能 | 第51-54页 |
| 4 讨论 | 第54-57页 |
| 5 结论 | 第57页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
| 第二部分 MiR-130a 介导 RunX3 修复糖尿病内皮祖细胞功能损伤 | 第60-73页 |
| 1 材料 | 第60页 |
| 1.1 主要试剂 | 第60页 |
| 1.2 主要设备 | 第60页 |
| 2 方法 | 第60-63页 |
| 2.1 内皮祖细胞的分离和培养 | 第60页 |
| 2.2 定量 PCR 和蛋白免疫印迹分析 | 第60-61页 |
| 2.3 microRNA 抑制剂转染 | 第61页 |
| 2.4 慢病毒的包装、转染 | 第61-62页 |
| 2.5 荧光素报告基因实验 | 第62-63页 |
| 2.6 流式分析内皮祖细胞分化和凋亡 | 第63页 |
| 2.7 克隆形成、增殖和迁移实验 | 第63页 |
| 2.8 统计分析 | 第63页 |
| 3 结果 | 第63-69页 |
| 3.1 抑制 miR-130a 促进了内皮祖细胞上 Runx3 的基因和蛋白表达 | 第63页 |
| 3.2 Runx3 是 miR-130a 在内皮祖细胞上的靶基因 | 第63-65页 |
| 3.3 抑制 miR-130a 损伤了内皮祖细胞的功能 | 第65-66页 |
| 3.4 MiR-130a 通过靶基因调控内皮祖细胞功能 | 第66-69页 |
| 4 讨论 | 第69-71页 |
| 5 结论 | 第71页 |
| 参考文献 | 第71-73页 |
| 第三部分 miR-107 介导 HIF1β抑制内皮祖细胞分化 | 第73-93页 |
| 1 材料 | 第73-77页 |
| 1.1 实验动物 | 第73页 |
| 1.2 主要试剂 | 第73-76页 |
| 1.3 主要设备 | 第76页 |
| 1.4 试剂配制 | 第76-77页 |
| 2 方法 | 第77-82页 |
| 2.1 内皮祖细胞的分离和鉴定 | 第77-79页 |
| 2.2 诱导内皮祖细胞向内皮细胞分化培养 | 第79页 |
| 2.3 蛋白免疫印迹分析 | 第79页 |
| 2.4 总 RNA 分离和定量 PCR | 第79-80页 |
| 2.5 miRNA 抑制剂转染 | 第80页 |
| 2.6 质粒构建和慢病毒的包装、转染 | 第80-82页 |
| 2.7 统计分析 | 第82页 |
| 3 结果 | 第82-88页 |
| 3.1 内皮祖细胞的分离和鉴定 | 第82-83页 |
| 3.2 低氧环境促进 miR-107 表达和内皮祖细胞分化 | 第83-84页 |
| 3.3 miR-107 抑制内皮祖细胞的分化 | 第84-86页 |
| 3.4 在低氧和常氧情况下 miR-107 抑制 HIF1β的表达 | 第86页 |
| 3.5 miR-107 通过下调 HIF-1β 抑制了内皮祖细胞分化 | 第86-88页 |
| 4 讨论 | 第88-90页 |
| 5 结论 | 第90页 |
| 参考文献 | 第90-93页 |
| 后续研究 | 第93页 |
| 附录 | 第93-97页 |
| 致谢 | 第97-99页 |
| 学术论文及奖励 | 第99-100页 |
