| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| LIST OF ABBREVIATION | 第8-10页 |
| TABLE OF CONTENS | 第10-13页 |
| Chapter 1 Introduction and literature review | 第13-21页 |
| 1.1 Recombinant Human Interleukin | 第13-16页 |
| 1.1.1 Melanoma Differentiation Associated Gene-7/IL24 and melanoma | 第14页 |
| 1.1.2 Apoptosis Inducing Properties of IL24 | 第14-15页 |
| 1.1.3 Antitumor Bystander Activity of IL24 | 第15-16页 |
| 1.1.4 Anti -angiogenic activity of IL24 | 第16页 |
| 1.1.5 Combination Therapy with IL24 | 第16页 |
| 1.1.6 IL24 and Mycobacterium Tuberculosis | 第16页 |
| 1.2 IL24 in Cancer Therapy | 第16-18页 |
| 1.3 Recombinant protein production | 第18-19页 |
| 1.4 Nanotechnology | 第19-20页 |
| 1.5 Research Objective | 第20-21页 |
| Chapter 2 A conventional method for fermentation and purification of Recombinant Human interleukin 24 from E. coli | 第21-26页 |
| 2.1 Introduction | 第21页 |
| 2.2 Materials and Methods | 第21页 |
| 2.2.1 Fermentation Media | 第21页 |
| 2.2.2 Batch Cultivation | 第21页 |
| 2.3 rh-IL24 purification | 第21-22页 |
| 2.3.1 Cell lysis and IB recovery | 第21-22页 |
| 2.3.2 IBs washing: | 第22页 |
| 2.3.3 IB solubilization and refolding | 第22页 |
| 2.3.4 Anion & Cation Exchange Chromatography | 第22页 |
| 2.3.5 SDS-PAGE | 第22页 |
| 2.4 Results and Discussion | 第22-25页 |
| 2.4.1 Cell lysis and IB isolation | 第22-23页 |
| 2.4.2 IB washing | 第23页 |
| 2.4.3 IB solubilization and refolding | 第23页 |
| 2.4.4 Anion & Cation Exchange Chromatography | 第23-25页 |
| 2.5 Conclusion | 第25-26页 |
| Chapter 3 Cost effective production of rhIL24 | 第26-37页 |
| 3.1 Introduction | 第26页 |
| 3.2 Materials and methods | 第26-29页 |
| 3.2.1 Bacterial strain and vector system | 第26页 |
| 3.2.2 Induction and expression of rhIL24 in culture flasks | 第26-27页 |
| 3.2.3 3L Fermentation of rhIL24 | 第27页 |
| 3.2.4 Disruption, washing and isolation of inclusion bodies (IBs) | 第27页 |
| 3.2.5 Two-step denaturing and refolding of rhIL24 IBs | 第27-28页 |
| 3.2.6 Diafiltration | 第28页 |
| 3.2.7 Cation exchange chromatography | 第28页 |
| 3.2.8 SDS-PAGE and western blot | 第28页 |
| 3.2.9 LC-MS/MS | 第28-29页 |
| 3.2.10 Bioactivity assay of rhIL24 in vitro | 第29页 |
| 3.3 Results and discussion | 第29-36页 |
| 3.3.1 Cloning and construction of the pET21a (+)-rhIL2417 | 第29页 |
| 3.3.2 Medium selection | 第29-30页 |
| 3.3.3 Lactose induction | 第30-31页 |
| 3.3.4 Cell lysis and inclusion body isolation | 第31-32页 |
| 3.3.5 IB washes | 第32页 |
| 3.3.6 IB solubilization and refolding | 第32-33页 |
| 3.3.7 Cation exchange chromatography | 第33-34页 |
| 3.3.8 Western blot analysis and LC-MS/MS | 第34-35页 |
| 3.3.9 Biological activity assay of rhIL24 | 第35-36页 |
| 3.4 Conclusions | 第36-37页 |
| Chapter 4 rhIL24 reverses Adriamycin resistance in MCF-7/ADM human breast cancer cell line | 第37-45页 |
| 4.1 Introduction | 第37页 |
| 4.2. Materials and Methods | 第37-39页 |
| 4.2.1 Bacterial Expression, Refolding, and Analysis | 第37-38页 |
| 4.2.2 Cells and cell cultures | 第38页 |
| 4.2.3 Cytotoxicity assay | 第38-39页 |
| 4.2.4 In situ analysis of P-gp expression by confocal laser scanning microscopy | 第39页 |
| 4.2.5 Western blot analysis of P-gp expression | 第39页 |
| 4.3. Results | 第39-43页 |
| 4.3.1 rhIL-24 expression and purification | 第39-40页 |
| 4.3.2 Modulation of ADM resistance | 第40-41页 |
| 4.3.3 P-gp expression by confocal laser scanning microscopy | 第41-42页 |
| 4.3.4 Western blot analysis of P-gp protein expression in tumor cells | 第42-43页 |
| 4.4. Discussion | 第43-45页 |
| Chapter 5 PEGylated Protamine-rhIL24 nanoparticle | 第45-53页 |
| 5.1 Introduction | 第45-46页 |
| 5.2 Materials and methods | 第46-47页 |
| 5.2.1 Materials | 第46页 |
| 5.2.2 Preparation of PEG-Protamine Complex | 第46页 |
| 5.2.3 Preparation of PEGylated Protamine-rhIL24 Nanoparticles | 第46-47页 |
| 5.3 Characterization | 第47-48页 |
| 5.3.1 Gel permeation Chromatography (GPC) for PEG Protamine Complex | 第47页 |
| 5.3.2 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy for PEG Protamine Complex | 第47页 |
| 5.3.3 Measurement of particle size, zeta potential (ζ) for PEGylated Protamine-rhIL24 Nanoparticle | 第47页 |
| 5.3.4 SDS-PAGE for PEGylated Protamine-rhIL24 Nanoparticle | 第47-48页 |
| 5.3.5 Transmission electron microscopy (TEM) for PEGylated Protamine-rhIL24 Nanoparticle | 第48页 |
| 5.3.6 PEGylated Protamine/IL24 nanoparticles cytotoxicity study | 第48页 |
| 5.4 Results and Discussion | 第48-52页 |
| 5.4.1 Gel permeation Chromatography (GPC) for PEG Protamine Complex | 第48-49页 |
| 5.4.2 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy for PEG Protamine Complex | 第49-50页 |
| 5.4.3 Measurement of particle size, zeta potential (ζ) PEGylated Protamine-rhIL24 Nanoparticle | 第50页 |
| 5.4.4 SDS-PAGE of PEGylated Protamine-rhIL24 Nanoparticle | 第50-51页 |
| 5.4.5 Transmission electron microscopy (TEM) for PEGylated Protamine-rhIL24 | 第51页 |
| 5.4.6 PEGylated Protamine/IL24 nanoparticles cytotoxicity study | 第51-52页 |
| 5.5 Conclusions | 第52-53页 |
| Major conclusion | 第53页 |
| Recommendation for future work | 第53-54页 |
| Key Innovations | 第54-55页 |
| Acknowledgements | 第55-56页 |
| References | 第56-64页 |
| APPENDIX | 第64-75页 |
