| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 前言 | 第11-27页 |
| 1. 非霍奇金淋巴瘤 | 第11-15页 |
| 1.1 NHL的流行病学 | 第11-12页 |
| 1.2 NHL的分期及组织学亚型 | 第12页 |
| 1.3 NHL的治疗 | 第12-15页 |
| 2. CD20 | 第15-18页 |
| 2.1 CD20的基因表达 | 第15-16页 |
| 2.2 CD20蛋白结构 | 第16页 |
| 2.3 治疗性抗CD20抗体 | 第16-18页 |
| 3. 核酸适配体 | 第18-23页 |
| 3.1 概述 | 第18页 |
| 3.2 核酸适配体与靶标分子结合的原理 | 第18-19页 |
| 3.3 核酸适配体筛选 | 第19-21页 |
| 3.3.1 SELEX | 第19页 |
| 3.3.2 提高核酸适配体选择性的筛选方法 | 第19-20页 |
| 3.3.3 增加核酸适配体普适性的筛选方法 | 第20-21页 |
| 3.3.4 体内筛选 | 第21页 |
| 3.4 核酸适配体介导的药物靶向传递系统 | 第21-23页 |
| 3.4.1 核酸适配体-siRNA嵌合体 | 第21-22页 |
| 3.4.2 核酸适配体-药物复合物 | 第22-23页 |
| 3.4.3 核酸适配体-脂质体复合物的靶向药物传递 | 第23页 |
| 3.4.4 核酸适配体-胶束复合物的靶向药物传递 | 第23页 |
| 4. 选题依据及研究意义 | 第23-24页 |
| 5. 研究策略和技术路线 | 第24-27页 |
| 5.1 拟解决的科学问题 | 第24-25页 |
| 5.2 研究策略 | 第25-26页 |
| 5.3 技术路线 | 第26-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-41页 |
| 1. 主要材料与试剂 | 第27-31页 |
| 1.1 细胞系 | 第27页 |
| 1.2 细菌 | 第27页 |
| 1.3 单链寡核苷酸文库和引物 | 第27页 |
| 1.4 多肽 | 第27页 |
| 1.5 磁珠 | 第27-28页 |
| 1.6 试剂盒 | 第28页 |
| 1.7 试剂及配制方法 | 第28-31页 |
| 1.7.1 培养用试剂 | 第28页 |
| 1.7.2 转染用试剂 | 第28页 |
| 1.7.3 其它试剂 | 第28-29页 |
| 1.7.4 试剂配制方法 | 第29-31页 |
| 2. 主要仪器和设备 | 第31-32页 |
| 3. 实验方法 | 第32-41页 |
| 3.1 核酸适配体体外筛选过程 | 第32-34页 |
| 3.1.1 CD20多肽与磁珠的偶联 | 第32页 |
| 3.1.2 初始随机库DNA文库的构建 | 第32-33页 |
| 3.1.3 核酸适配体的筛选过程 | 第33-34页 |
| 3.1.4 核酸适配体的克隆检测 | 第34页 |
| 3.2 流式细胞术检测 | 第34-36页 |
| 3.2.1 文库筛选进程检测 | 第34页 |
| 3.2.2 核酸适配体Z17和靶标蛋白特异性结合的检测 | 第34-35页 |
| 3.2.3 核酸适配体Z17 K_d值的测定 | 第35页 |
| 3.2.4 核酸适配体Z17结构预测 | 第35页 |
| 3.2.5 核酸适配体Z17与细胞结合特异性检测 | 第35-36页 |
| 3.2.5.1 Raji细胞,Ramos细胞和Jurkat细胞培养 | 第35页 |
| 3.2.5.2 核酸适配体Z17和CD20阳性/阴性淋巴瘤细胞结合的测定 | 第35页 |
| 3.2.5.3 核酸适配体Z17与胰蛋白酶消化的细胞结合的检测 | 第35-36页 |
| 3.3 CD20基因干扰实验 | 第36页 |
| 3.4 Western Blot实验 | 第36-38页 |
| 3.5 核酸适配体Z17与下调CD20蛋白表达的Raji细胞结合能力的测定 | 第38-39页 |
| 3.6 核酸适配体Z17靶向运输抗肿瘤药物阿霉素试验 | 第39-40页 |
| 3.6.1 构建核酸适配体-阿霉素复合物 | 第39页 |
| 3.6.2 淋巴瘤细胞对核酸适配体-阿霉素复合物的摄入 | 第39-40页 |
| 3.6.3 核酸适配体-阿霉素复合物对细胞增殖的影响 | 第40页 |
| 3.7 统计学方法 | 第40-41页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第41-56页 |
| 1. CD20核酸适配体的筛选过程 | 第41-44页 |
| 2. 核酸适配体Z17结构分析 | 第44页 |
| 3. 核酸适配体Z17结合特性分析 | 第44-51页 |
| 3.1 Z17与靶标蛋白的特异性结合 | 第44-46页 |
| 3.2 Z17亲和力常数的测定 | 第46页 |
| 3.3 Z17与CD20阳性淋巴瘤细胞的结合 | 第46-48页 |
| 3.4 CD20阳性淋巴瘤细胞表面蛋白质含量对Z17结合的影响 | 第48-49页 |
| 3.5 CD20基因干扰实验 | 第49-51页 |
| 4. Z17作为靶向分子将细胞毒药物选择性递呈至CD20阳性淋巴瘤细胞 | 第51-56页 |
| 4.1 核酸适配体-阿霉素复合物(Apt-Dox)的构建 | 第51页 |
| 4.2 CD20阳性淋巴瘤细胞和CD20阴性淋巴瘤细胞对核酸适配体-阿霉素复合物的摄取 | 第51-54页 |
| 4.3 核酸适配体-阿霉素复合物能够选择性减低细胞毒药物对CD20阴性淋巴瘤细胞的杀伤 | 第54-56页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第56-59页 |
| 1. 讨论 | 第56-58页 |
| 2. 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-72页 |
| 附录一 英文缩略词汇表 | 第72-74页 |
| 附录二 个人简历 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
