摘要 | 第6-7页 |
ABSTRACT | 第7页 |
目录 | 第8-11页 |
第一章 绪论 | 第11-18页 |
1.1 家族性高胆固醇血症的发生、诊断与治疗 | 第11-12页 |
1.2 PCSK9 的研究进展 | 第12-14页 |
1.2.1 PCSK9 的功能 | 第12-14页 |
1.2.2 PCSK9 抑制剂类型及相关临床进展 | 第14页 |
1.3 microRNA 的生成过程与作用机制 | 第14-16页 |
1.4 研究内容与意义 | 第16-18页 |
第二章 材料和方法 | 第18-37页 |
2.1 细胞来源 | 第18页 |
2.2 试剂及其配制 | 第18-21页 |
2.2.1 试剂盒 | 第18页 |
2.2.2 试剂 | 第18-20页 |
2.2.3 实验试剂的配制 | 第20-21页 |
2.3 实验仪器 | 第21-23页 |
2.4 实验方法 | 第23-37页 |
2.4.1 细胞培养 | 第23-24页 |
2.4.2 细胞转染 | 第24页 |
2.4.3 模板 cDNA 的制备 | 第24-27页 |
2.4.4 载体构建 | 第27-31页 |
2.4.5 双荧光素酶报告基因分析 | 第31-32页 |
2.4.6 点突变实验 | 第32-33页 |
2.4.7 实时定量 PCR(Real-time PCR) | 第33-34页 |
2.4.8 蛋白质印迹法(Western Blot) | 第34-35页 |
2.4.9 免疫荧光实验 | 第35-36页 |
2.4.10 脂内吞实验 | 第36-37页 |
第三章 结果与讨论 | 第37-56页 |
3.1 miR-24 靶基因的筛选与鉴定 | 第37-43页 |
3.1.1 miR-24 靶基因的寻找 | 第37-38页 |
3.1.2 miR-24 与 PCSK9-mRNA 结合位点的预测 | 第38-40页 |
3.1.3 miR-24 靶向作用于 PCSK9 的 5′UTR 和 3′UTR | 第40-42页 |
3.1.4 miR-24 靶基因的筛选与鉴定实验的讨论 | 第42-43页 |
3.2 miR-24 对 PCSK9 及其下游蛋白的调控研究 | 第43-50页 |
3.2.1 PCSK9 表达载体的构建 | 第43-45页 |
3.2.2 HEK-293T 细胞中 miR-24 对外源性 PCSK9 的抑制作用 | 第45-46页 |
3.2.3 HepG2 细胞中 miR-24 对内源性 PCSK9 的调控作用 | 第46-47页 |
3.2.4 miR-24 对 LDLR 的调控作用 | 第47-49页 |
3.2.5 miR-24 对 PCSK9 及其下游蛋白调控研究的讨论 | 第49-50页 |
3.3 miR-24 对细胞脂质摄取能力的影响 | 第50-53页 |
3.3.1 miR-24 促进肝来源细胞对 LDL 的摄取 | 第50-52页 |
3.3.2 HEK-293T 细胞中 miR-24 对脂内吞过程无明显作用 | 第52-53页 |
3.3.3 关于脂内吞实验的讨论 | 第53页 |
3.4 miR-24 对鼠源 PCSK9 的调控研究 | 第53-56页 |
3.4.1 miR-24 对鼠源 PCSK9 蛋白表达的影响 | 第53-54页 |
3.4.2 miR-24 对鼠源 PCSK9 的调控研究的讨论 | 第54-56页 |
第四章 结论与展望 | 第56-59页 |
4.1 结论 | 第56-57页 |
4.2 展望 | 第57-59页 |
参考文献 | 第59-65页 |
缩略词对照表 | 第65-66页 |
硕士期间公开发表的专利 | 第66-67页 |
硕士期间公开参与的项目 | 第67-68页 |
致谢 | 第68页 |