| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第11页 |
| 1 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 枝角类生殖发育生物学研究 | 第11-14页 |
| 1.1.1 生殖发育的组织形态学研究 | 第11页 |
| 1.1.2 影响枝角类生殖转化的环境因素 | 第11-12页 |
| 1.1.3 生殖相关的分子水平研究 | 第12-14页 |
| 1.2 Doublesex (dsx)的研究概况 | 第14-17页 |
| 1.2.1 dsx 的结构和功能 | 第14页 |
| 1.2.2 dsx 参与性别分化 | 第14-15页 |
| 1.2.3 Dsx pre-mRNA 的性别特异性拼接 | 第15-17页 |
| 1.2.4 Dsx 控制两性性征 | 第17页 |
| 1.3 整体原位杂交技术 | 第17-18页 |
| 1.4 RNA 干扰研究基因的功能 | 第18-19页 |
| 1.5 本文的研究目的和意义 | 第19-21页 |
| 2 蚤状溞 dsx1 基因全长 cDNA 的克隆与表达 | 第21-38页 |
| 2.1 实验材料和主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验溞来源及驯化 | 第21页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.4 引物序列 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-27页 |
| 2.2.1 蚤状溞总 RNA 的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2 cDNA 第一链的合成 | 第23页 |
| 2.2.3 蚤状溞 dsx1 基因目的片段的克隆 | 第23-25页 |
| 2.2.3.1 蚤状溞 dsx1 基因兼并引物的设计 | 第23页 |
| 2.2.3.2 目的片段的 PCR 扩增 | 第23页 |
| 2.2.3.3 PCR 产物的回收 | 第23-24页 |
| 2.2.3.4 感受态细胞的制备 | 第24页 |
| 2.2.3.5 目的片段的连接、转化和筛选 | 第24-25页 |
| 2.2.4 RACE 扩增蚤状溞 dsx1 cDNA 的全长序列 | 第25-26页 |
| 2.2.4.1 Dsx1 基因的 RACE-PCR 引物设计 | 第25页 |
| 2.2.4.2 Dsx1 基因的 RACE 模板的合成 | 第25-26页 |
| 2.2.4.3 RACE-PCR | 第26页 |
| 2.2.5 蚤状溞 dsx1 的序列分析 | 第26-27页 |
| 2.2.6 Dsx1 mRNA 在不同生殖状态蚤状溞的表达 | 第27页 |
| 2.2.6.1 荧光定量 PCR | 第27页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第27-36页 |
| 2.3.1 蚤状溞总 RNA 提取 | 第27页 |
| 2.3.2 蚤状溞 dsx1 基因的目的片段克隆 | 第27-28页 |
| 2.3.3 蚤状溞 dsx1 全长 cDNA 的克隆 | 第28-29页 |
| 2.3.4 Dpdsx1 序列特征分析 | 第29-31页 |
| 2.3.5 蚤状溞 Dpdsx1 蛋白结构分析 | 第31-34页 |
| 2.3.6 蚤状溞 Dpdsx1 氨基酸序列同源性分析 | 第34-35页 |
| 2.3.7 蚤状溞 Dpdsx1 在不同生殖状态下表达 | 第35-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-38页 |
| 3 整体原位杂交定位 Dpdsx1 的表达位点 | 第38-45页 |
| 3.1 实验材料 | 第38页 |
| 3.2 主要试剂 | 第38-39页 |
| 3.3 主要仪器 | 第39页 |
| 3.4 试验方法 | 第39-41页 |
| 3.4.1 探针的制备 | 第39-40页 |
| 3.4.2 整体原位杂交 | 第40-41页 |
| 3.5 实验结果与分析 | 第41-43页 |
| 3.5.1 探针合成效果 | 第41-42页 |
| 3.5.2 整体原位杂交 | 第42-43页 |
| 3.6 讨论 | 第43-44页 |
| 3.7 本章小结 | 第44-45页 |
| 4 RNA 干扰 Dpdsx1 基因的表达研究 | 第45-53页 |
| 4.1 实验材料和主要仪器 | 第45页 |
| 4.2 实验方法 | 第45-48页 |
| 4.2.1 dsRNA 的制备 | 第45-47页 |
| 4.2.1.1 dsRNA 表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 4.2.1.2 Dpdsx1dsRNA 的合成 | 第46-47页 |
| 4.2.2 dsRNA 浸泡蚤状溞 | 第47页 |
| 4.2.3 干扰后表达检测 | 第47-48页 |
| 4.2.3.1 荧光定量 PCR | 第47-48页 |
| 4.2.3.2 整体原位杂交 | 第48页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第48-51页 |
| 4.3.1 蚤状溞 Dpdsx1 活体外 RNAi | 第48-49页 |
| 4.3.2 干扰后表达检测 | 第49-51页 |
| 4.3.2.1 Dpdsx1 mRNA 在不同生殖状态溞中表达量变化 | 第49-50页 |
| 4.3.2.2 Dpdsx1 mRNA 在不同生殖状态溞中表达位点变化 | 第50-51页 |
| 4.4 讨论 | 第51-52页 |
| 4.5 本章小结 | 第52-53页 |
| 5 结论与创新点 | 第53-55页 |
| 5.1 结论 | 第53-54页 |
| 5.2 创新点 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 在学研究成果 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
