| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 前言 | 第13-27页 |
| 1.1 深海热液口管状蠕虫 | 第13-16页 |
| 1.1.1 热液口的形成 | 第13-14页 |
| 1.1.2 管状蠕虫 | 第14-16页 |
| 1.1.2.1 管状蠕虫的分类 | 第14-15页 |
| 1.1.2.2 管状蠕虫的结构 | 第15-16页 |
| 1.1.2.3 管状蠕虫的研究进展 | 第16页 |
| 1.2 凝集素 | 第16-19页 |
| 1.2.1 凝集素的分布 | 第17页 |
| 1.2.2 凝集素的分类 | 第17-18页 |
| 1.2.3 凝集素的生物学功能 | 第18-19页 |
| 1.3 半乳糖凝集素 | 第19-23页 |
| 1.3.1 动物凝集素的分类 | 第19页 |
| 1.3.2 半乳糖凝集素的成员及结构特征 | 第19-20页 |
| 1.3.3 半乳糖凝集素的性质 | 第20-21页 |
| 1.3.3.1 表达与分泌 | 第20-21页 |
| 1.3.4 半乳糖凝集素的功能 | 第21-23页 |
| 1.3.4.1 识别功能 | 第21-22页 |
| 1.3.4.2 调节细胞凋亡 | 第22-23页 |
| 1.3.4.3 对肿瘤的作用 | 第23页 |
| 1.3.5 应用前景 | 第23页 |
| 1.4 Ricin B-lectin | 第23-26页 |
| 1.4.1 蓖麻毒素 | 第23-25页 |
| 1.4.1.1 蓖麻毒素的结构和理化性质 | 第24-25页 |
| 1.4.2 Ricin B-lectin | 第25-26页 |
| 1.4.2.1 Ricin B-lectin 的结构与分布 | 第25-26页 |
| 1.4.2.2 Ricin B-lectin 的应用 | 第26页 |
| 1.5 本论文研究目的与意义 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-45页 |
| 2.1 材料 | 第27-29页 |
| 2.1.1 样品 | 第27页 |
| 2.1.2 菌株和质粒载体 | 第27页 |
| 2.1.3 细菌和细胞 | 第27页 |
| 2.1.4 工具酶及相关试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.5 试剂盒 | 第28页 |
| 2.1.6 分析软件及工具 | 第28页 |
| 2.1.7 寡核苷酸 | 第28-29页 |
| 2.2 培养基及主要试剂的配制 | 第29-32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-45页 |
| 2.3.1 rpgal 和 rprbl 基因及其编码蛋白质的序列分析 | 第32页 |
| 2.3.2 rpgal 和 rprbl 基因的克隆 | 第32-38页 |
| 2.3.2.1 管状蠕虫总 RNA 的提取 | 第32-33页 |
| 2.3.2.2 反转录合成 cDNA | 第33页 |
| 2.3.2.3 PCR 扩增 | 第33-34页 |
| 2.3.2.4 PCR 产物加 A 处理 | 第34页 |
| 2.3.2.5 加 A 后目的片段的回收、纯化和定量 | 第34-35页 |
| 2.3.2.6 目的片段与 pMD 18-T 载体的连接及转化 | 第35页 |
| 2.3.2.7 阳性质粒的提取、酶切与测序鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3.2.8 原核表达载体质粒的构建与转化 | 第36-37页 |
| 2.3.2.9 阳性质粒的鉴定及筛选 | 第37-38页 |
| 2.3.3 重组蛋白 RPGAL/RPRBL 的表达、纯化、鉴定及定量 | 第38-41页 |
| 2.3.3.1 RPGAL/RPRBL 在不同宿主中表达的小量检测 | 第38-39页 |
| 2.3.3.2 重组蛋白 RPGAL/RPRBL 的可溶性分析 | 第39页 |
| 2.3.3.3 重组蛋白 RPGAL/RPRBL 的纯化及透析 | 第39-40页 |
| 2.3.3.3.1 RPGAL 的纯化与透析 | 第39-40页 |
| 2.3.3.3.2 RPRBL 的纯化与透析 | 第40页 |
| 2.3.3.4 Western blot 检测 | 第40-41页 |
| 2.3.3.5 蛋白浓度的测定 | 第41页 |
| 2.3.4 RPGAL 和 RPRBL 生物活性的分析 | 第41-45页 |
| 2.3.4.1 RPGAL 和 RPRBL 的凝集活性分析 | 第41-42页 |
| 2.3.4.1.1 RPGAL 和 RPRBL 对不同来源血细胞的凝集活性 | 第41页 |
| 2.3.4.1.2 RPGAL 和 RPRBL 对不同种类微生物的凝集活性 | 第41-42页 |
| 2.3.4.2 外界因素对 RPGAL 凝集活性的分析 | 第42-43页 |
| 2.3.4.2.1 温度对凝集活性的影响 | 第42页 |
| 2.3.4.2.2 pH 对凝集活性的影响 | 第42页 |
| 2.3.4.2.3 金属离子对凝集活性的影响 | 第42页 |
| 2.3.4.2.4 糖基化试验 | 第42-43页 |
| 2.3.4.3 凝集抑制分析 | 第43页 |
| 2.3.4.4 RPGAL 对肿瘤细胞的作用 | 第43-45页 |
| 2.3.4.4.1 RPGAL 对肿瘤细胞毒性作用的分析 | 第43-44页 |
| 2.3.4.4.1.1 细胞形态分析 | 第43页 |
| 2.3.4.4.1.2 细胞增殖-毒性检测 | 第43-44页 |
| 2.3.4.4.2 RPGAL 对肿瘤细胞促凋亡作用的分析 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-68页 |
| 3.1 RPGAL 的结果与分析 | 第45-62页 |
| 3.1.1 RPGAL 的生物信息学分析 | 第45-47页 |
| 3.1.2 rpgal 基因的克隆 | 第47-52页 |
| 3.1.2.1 管状蠕虫 R. piscesae 总 RNA 的提取 | 第47-48页 |
| 3.1.2.2 管状蠕虫 R.piscesae rpgal 基因的重组克隆 | 第48-50页 |
| 3.1.2.3 RPGAL 的重组表达与纯化 | 第50-51页 |
| 3.1.2.4 重组蛋白的浓度测定 | 第51-52页 |
| 3.1.3 RPGAL 生物活性的分析 | 第52-62页 |
| 3.1.3.1 凝集活性的分析 | 第52-55页 |
| 3.1.3.2 RPGAL 凝集活性的糖抑制分析 | 第55-56页 |
| 3.1.3.3 RPGAL 的性质分析 | 第56-59页 |
| 3.1.3.4 RPGAL 对肿瘤细胞的作用 | 第59-62页 |
| 3.1.3.4.1 细胞形态分析 | 第59-60页 |
| 3.1.3.4.2 细胞增殖-毒性检测 | 第60-61页 |
| 3.1.3.4.3 凋亡作用 | 第61-62页 |
| 3.2 RPRBL 的结果与分析 | 第62-68页 |
| 3.2.1 RPRBL 的生物信息学分析 | 第62-64页 |
| 3.2.2 rprbl 基因的克隆 | 第64-67页 |
| 3.2.2.1 rprbl 的重组克隆 | 第64-65页 |
| 3.2.2.2 RPRBL 的重组表达与纯化 | 第65-67页 |
| 3.2.2.3 重组蛋白的浓度测定 | 第67页 |
| 3.2.3 RPRBL 生物活性的分析 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-72页 |
| 4.1 RPGAL | 第68-70页 |
| 4.2 RPRBL | 第70-72页 |
| 5 小结与展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-82页 |
| 附录 1 | 第82-85页 |
| 附录 2 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
