| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1. 引言与文献综述 | 第9-22页 |
| 1.1 细胞迁移、细胞粘附的形成与解体 | 第9-14页 |
| 1.2 Talin蛋白 | 第14-17页 |
| 1.3 Calpain 2的酶切 | 第17-19页 |
| 1.4 重组PCR法诱导定点突变 | 第19-20页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第20-22页 |
| 2. 材料与方法 | 第22-51页 |
| 2.1 材料 | 第22-32页 |
| 2.1.1 仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.1.2 主要试剂和耗材 | 第23-25页 |
| 2.1.3 动物细胞系与菌种 | 第25页 |
| 2.1.4 常用溶液的配制方法 | 第25-32页 |
| 2.2 方法与步骤 | 第32-51页 |
| 2.2.1 Talin(头部片段)定点突变及表达载体的构建 | 第32-39页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第39-40页 |
| 2.2.3 蛋白的处理 | 第40-43页 |
| 2.2.4 Western blotting技术 | 第43-46页 |
| 2.2.6 非放射性检测PKC或PKA的活性 | 第46-48页 |
| 2.2.7 细胞迁移和细胞粘附实验 | 第48-51页 |
| 3. 结果与分析 | 第51-67页 |
| 3.1 Calpain 2酶切效果检测 | 第51-52页 |
| 3.2 RNA干扰确认calpain 2的酶切功能 | 第52-53页 |
| 3.3 苏氨酸或丝氨酸的磷酸化抗体检测 | 第53-55页 |
| 3.4 PKC,PKA含量测定 | 第55-58页 |
| 3.5 MAPK级联途径,ERK的激活 | 第58-59页 |
| 3.6 免疫荧光双定位验证粘附斑的形成 | 第59-61页 |
| 3.7 粘附斑实时观察解体 | 第61-62页 |
| 3.8 细胞群粘附水平直观比较 | 第62-63页 |
| 3.9 细胞群粘附水平定量比较 | 第63-64页 |
| 3.10 Wound-healing(划痕)assays和Transwell assays | 第64-67页 |
| 4. 讨论 | 第67-71页 |
| 4.1 粘附斑形成,解体与细胞迁移 | 第67-68页 |
| 4.2 与MAPK级联途径建立联系 | 第68-69页 |
| 4.3 实验中遇到的困难及解决办法 | 第69-71页 |
| 5. 结语 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间科研成果 | 第77-78页 |
