英文缩略词 | 第4-8页 |
中文摘要 | 第8-10页 |
Abstract | 第10-11页 |
1 引言 | 第12-22页 |
1.1 猪氧化应激与抗氧化性能 | 第12-14页 |
1.1.1 氧化系统与抗氧化系统 | 第12-13页 |
1.1.2 肌肉抗氧化性能 | 第13-14页 |
1.2 Keap1-Nrf2-ARE研究进展 | 第14-16页 |
1.2.1 Keap1、Nrf2、ARE关系 | 第14页 |
1.2.2 Nrf2结构与功能 | 第14-15页 |
1.2.3 Nrf2基因研究进展 | 第15-16页 |
1.3 启动子(Promoter)及研究进展 | 第16-17页 |
1.4 试验技术 | 第17-21页 |
1.4.1 cDNA末端快速克隆(RACE)技术 | 第17-18页 |
1.4.2 巢式PCR(Nest-PCR)和降落PCR(TouchDownPCR) | 第18-19页 |
1.4.3 实时荧光定量PCR(RealTimeQuantiativePCR,qRT-PCR) | 第19-20页 |
1.4.4 染色体步移技术(GenomeWalkingTechnique) | 第20-21页 |
1.5 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
2 材料和方法 | 第22-44页 |
2.1 试验材料 | 第22-26页 |
2.1.1 试验动物及样品采集处理 | 第22-23页 |
2.1.2 主要仪器 | 第23-24页 |
2.1.3 试验常用试剂及耗材 | 第24-25页 |
2.1.4 常用试剂的配制 | 第25-26页 |
2.2 实验方法 | 第26-44页 |
2.2.1 不同猪种抗氧化性能测定 | 第26-27页 |
2.2.2 Nrf2基因的cDNA全长扩增 | 第27-31页 |
2.2.3 Nrf基因cDNA全长测序 | 第31-33页 |
2.2.4 生物信息学分析 | 第33-34页 |
2.2.5 荧光定量PCR | 第34-35页 |
2.2.6 Nrf基因启动子克隆 | 第35-38页 |
2.2.7 Nrf2基因启动子重组载体的构建及质粒提取 | 第38-41页 |
2.2.8 细胞培养及双荧光素酶活性检测 | 第41-44页 |
3 结果与分析 | 第44-59页 |
3.1 不同猪种抗氧化性能比较 | 第44页 |
3.2 Nrf2基因的cDNA全长的扩增 | 第44-46页 |
3.2.1 总RNA提取与质量检测 | 第44-45页 |
3.2.2 5'RACE、3'RACE和中间片段扩增 | 第45页 |
3.2.3 菌液PCR结果 | 第45-46页 |
3.3 测序结果及生物信息学分析 | 第46-53页 |
3.3.1 序列拼接 | 第46-47页 |
3.3.2 生物信息学分析 | 第47-53页 |
3.4 猪Nrf2基因的表达分析 | 第53-55页 |
3.4.1 荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线绘制 | 第53-54页 |
3.4.2 大蒲莲猪Nrf2基因的组织表达谱 | 第54页 |
3.4.3 大蒲莲猪和长白猪不同组之间Nrf2基因表达差异 | 第54-55页 |
3.5 猪Nrf2基因启动子克隆及转录活性分析 | 第55-59页 |
3.5.1 Nrf2基因5'侧翼序列扩增 | 第55-56页 |
3.5.2 启动子区菌液PCR结果 | 第56页 |
3.5.3 Nrf2基因5'侧翼序列分析 | 第56-57页 |
3.5.4 Nrf2基因不同长度启动子片段的扩增 | 第57-58页 |
3.5.5 细胞培养、转染及双荧光素酶检测 | 第58-59页 |
4 讨论 | 第59-63页 |
4.1 猪Nrf2的生物信息学分析 | 第59-60页 |
4.2 Nrf2基因mRNA的组织和品种表达差异 | 第60-61页 |
4.3 猪Nrf2基因启动子活性分析 | 第61-63页 |
5 结论 | 第63-64页 |
参考文献 | 第64-74页 |
致谢 | 第74-75页 |
攻读学位期间发表论文情况 | 第75页 |