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大蒲莲猪Nrf2基因克隆、表达分析及其启动子区活性研究

英文缩略词第4-8页
中文摘要第8-10页
Abstract第10-11页
1 引言第12-22页
    1.1 猪氧化应激与抗氧化性能第12-14页
        1.1.1 氧化系统与抗氧化系统第12-13页
        1.1.2 肌肉抗氧化性能第13-14页
    1.2 Keap1-Nrf2-ARE研究进展第14-16页
        1.2.1 Keap1、Nrf2、ARE关系第14页
        1.2.2 Nrf2结构与功能第14-15页
        1.2.3 Nrf2基因研究进展第15-16页
    1.3 启动子(Promoter)及研究进展第16-17页
    1.4 试验技术第17-21页
        1.4.1 cDNA末端快速克隆(RACE)技术第17-18页
        1.4.2 巢式PCR(Nest-PCR)和降落PCR(TouchDownPCR)第18-19页
        1.4.3 实时荧光定量PCR(RealTimeQuantiativePCR,qRT-PCR)第19-20页
        1.4.4 染色体步移技术(GenomeWalkingTechnique)第20-21页
    1.5 本研究的目的和意义第21-22页
2 材料和方法第22-44页
    2.1 试验材料第22-26页
        2.1.1 试验动物及样品采集处理第22-23页
        2.1.2 主要仪器第23-24页
        2.1.3 试验常用试剂及耗材第24-25页
        2.1.4 常用试剂的配制第25-26页
    2.2 实验方法第26-44页
        2.2.1 不同猪种抗氧化性能测定第26-27页
        2.2.2 Nrf2基因的cDNA全长扩增第27-31页
        2.2.3 Nrf基因cDNA全长测序第31-33页
        2.2.4 生物信息学分析第33-34页
        2.2.5 荧光定量PCR第34-35页
        2.2.6 Nrf基因启动子克隆第35-38页
        2.2.7 Nrf2基因启动子重组载体的构建及质粒提取第38-41页
        2.2.8 细胞培养及双荧光素酶活性检测第41-44页
3 结果与分析第44-59页
    3.1 不同猪种抗氧化性能比较第44页
    3.2 Nrf2基因的cDNA全长的扩增第44-46页
        3.2.1 总RNA提取与质量检测第44-45页
        3.2.2 5'RACE、3'RACE和中间片段扩增第45页
        3.2.3 菌液PCR结果第45-46页
    3.3 测序结果及生物信息学分析第46-53页
        3.3.1 序列拼接第46-47页
        3.3.2 生物信息学分析第47-53页
    3.4 猪Nrf2基因的表达分析第53-55页
        3.4.1 荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线绘制第53-54页
        3.4.2 大蒲莲猪Nrf2基因的组织表达谱第54页
        3.4.3 大蒲莲猪和长白猪不同组之间Nrf2基因表达差异第54-55页
    3.5 猪Nrf2基因启动子克隆及转录活性分析第55-59页
        3.5.1 Nrf2基因5'侧翼序列扩增第55-56页
        3.5.2 启动子区菌液PCR结果第56页
        3.5.3 Nrf2基因5'侧翼序列分析第56-57页
        3.5.4 Nrf2基因不同长度启动子片段的扩增第57-58页
        3.5.5 细胞培养、转染及双荧光素酶检测第58-59页
4 讨论第59-63页
    4.1 猪Nrf2的生物信息学分析第59-60页
    4.2 Nrf2基因mRNA的组织和品种表达差异第60-61页
    4.3 猪Nrf2基因启动子活性分析第61-63页
5 结论第63-64页
参考文献第64-74页
致谢第74-75页
攻读学位期间发表论文情况第75页

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