| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 前言 | 第9-21页 |
| 1.1 自由基及其产生 | 第9-10页 |
| 1.2 自由基的生物学效应 | 第10-12页 |
| 1.2.1 自由基的危害 | 第10-11页 |
| 1.2.2 自由基的生理作用 | 第11-12页 |
| 1.2.3 ROS 双重作用在医学应用上的意义 | 第12页 |
| 1.3 机体的抗氧化系统 | 第12-15页 |
| 1.3.1 抗氧化酶 | 第13-15页 |
| 1.3.1.1 SOD | 第13-14页 |
| 1.3.1.2 CAT | 第14页 |
| 1.3.1.3 GSH-Px | 第14-15页 |
| 1.3.2 抗氧化剂 | 第15页 |
| 1.4 ROS、抗氧化酶和肿瘤 | 第15-17页 |
| 1.4.1 ROS 与癌细胞 | 第15-16页 |
| 1.4.2 抗氧化剂与肿瘤 | 第16-17页 |
| 1.4.3 癌症治疗的新思路 | 第17页 |
| 1.5 TAT-PTD 活性蛋白 | 第17-18页 |
| 1.6 课题目的与意义 | 第18-19页 |
| 1.7 课题研究内容 | 第19-20页 |
| 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-35页 |
| 2.1 材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第21页 |
| 2.1.2 细胞株 | 第21页 |
| 2.1.3 主要的药品和试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 缓冲溶液 | 第22-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-35页 |
| 2.2.1 PTD-SOD 融合蛋白的分离纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.1.1 融合蛋白 PTD-SOD 发酵液样品的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.1.2 亲和层析 | 第24页 |
| 2.2.2 SOD 融合蛋白浓度、纯度、酶活力的测定 | 第24-27页 |
| 2.2.2.1 考马斯亮兰法测定 SOD 融合蛋白浓度 | 第24-25页 |
| 2.2.2.2 样品纯度分析 | 第25页 |
| 2.2.2.3 SOD 蛋白酶活的测定 | 第25-27页 |
| 2.2.3 细胞培养和细胞活力检测 | 第27页 |
| 2.2.3.1 细胞培养 | 第27页 |
| 2.2.3.2 MTT 检测法 | 第27页 |
| 2.2.3.3 样品毒性实验 | 第27页 |
| 2.2.4 免疫蛋白印迹 | 第27-29页 |
| 2.2.4.1 细胞培养 | 第27-28页 |
| 2.2.4.2 蛋白样品制备 | 第28页 |
| 2.2.4.3 蛋白含量的测定 | 第28页 |
| 2.2.4.4 转膜 | 第28页 |
| 2.2.4.5 免疫反应 | 第28-29页 |
| 2.2.5 免疫荧光法测定胞内蛋白定位 | 第29页 |
| 2.2.6 DCFH-DA 测定细胞内自由基水平的改变 | 第29页 |
| 2.2.7 PTD-SOD 融合蛋白对细胞内各项抗氧化指标的影响 | 第29-33页 |
| 2.2.7.1 细胞的收集与破碎 | 第29-30页 |
| 2.2.7.2 胞内 SOD 酶活力的测定 | 第30页 |
| 2.2.7.3 胞内 CAT 酶活力的测定 | 第30页 |
| 2.2.7.4 胞内总抗氧化能力（T-AOC）含量的测定 | 第30-31页 |
| 2.2.7.5 胞内 GSH-Px 酶活力的测定 | 第31-33页 |
| 2.2.8 PTD-SOD 对细胞增殖的影响 | 第33-34页 |
| 2.2.8.1 PTD-SOD 作用下细胞生长曲线绘制 | 第33-34页 |
| 2.2.8.2 样品对细胞克隆形成率的影响 | 第34页 |
| 2.2.9 统计学处理 | 第34-35页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第35-57页 |
| 3.1 PTD-SOD 融合蛋白纯化 | 第35-36页 |
| 3.1.1 PTD-SOD 融合蛋白纯化后鉴定 | 第35页 |
| 3.1.2 PTD-SOD 融合蛋白对细胞毒性作用 | 第35-36页 |
| 3.2 PTD-SOD 融合蛋白跨膜能力的测定 | 第36-42页 |
| 3.2.1 胞内免疫间接荧光法验证 PTD-SOD 融合蛋白跨膜能力 | 第37-39页 |
| 3.2.1.1 共培养时间对 PTD-SOD 融合蛋白跨膜能力的影响 | 第37-38页 |
| 3.2.1.2 浓度对 PTD-SOD 融合蛋白跨膜能力的影响 | 第38-39页 |
| 3.2.2 胞内蛋白印迹验证 PTD-SOD 融合蛋白跨膜能力 | 第39-40页 |
| 3.2.3 PTD-SOD 融合蛋白跨膜能力测定小结 | 第40-42页 |
| 3.3 融合蛋白对细胞内自由基水平的影响 | 第42-44页 |
| 3.3.1 ROS 水平测定 | 第42-44页 |
| 3.3.2 PTD-SOD 融合蛋白对细胞内 ROS 水平影响小结 | 第44页 |
| 3.4 融合蛋白对胞内抗氧化指标的改变 | 第44-49页 |
| 3.4.1 胞内 T-AOC 水平的改变 | 第45-46页 |
| 3.4.2 胞内 SOD 水平的改变 | 第46-47页 |
| 3.4.3 胞内 GSH-Px 水平的改变 | 第47-48页 |
| 3.4.4 胞内 CAT 水平的改变 | 第48页 |
| 3.4.5 PTD-SOD 融合蛋白对细胞内抗氧化酶活力影响小结 | 第48-49页 |
| 3.5 细胞形态学观察 | 第49-51页 |
| 3.6 融合蛋白对细胞增殖水平的影响 | 第51-57页 |
| 3.6.1 对肝癌细胞生长曲线的影响 | 第51-53页 |
| 3.6.2 对肝细胞生长曲线的影响 | 第53-54页 |
| 3.6.3 对细胞平板克隆率的影响 | 第54-57页 |
| 结论与展望 | 第57-60页 |
| 总结 | 第57-59页 |
| 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 个人简历、在学期间的研究成果及发表的学术论文 | 第67页 |
