| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 中英文缩略表 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-17页 |
| 第1章 Rock2 对肝癌细胞生物学活性的影响 | 第17-50页 |
| 材料与方法 | 第17-39页 |
| 1 材料 | 第17-22页 |
| 2 细胞培养 | 第22-23页 |
| 3 Rock2 干扰质粒 pcDNA 6.2-GW/EmGFPmiR-Rock2 的构建 | 第23-32页 |
| 4 RNA 的提取及聚合酶链反应（PCR） | 第32-33页 |
| 5 蛋白免疫印迹反应（Western blot） | 第33-36页 |
| 6 MTT 法检测细胞的增殖抑制情况 | 第36-37页 |
| 7 流式细胞术分析细胞周期变化情况 | 第37页 |
| 8 流式细胞仪（Annexin V-PI 双染色法）检测细胞凋亡 | 第37-39页 |
| 9 统计学分析 | 第39页 |
| 结果 | 第39-47页 |
| 1 Rock2 最佳干扰质粒的筛选 | 第39-40页 |
| 2 Rock2 最佳干扰质粒稳转到肝癌细胞 Huh-7 和 HepG2 | 第40-42页 |
| 3 干扰 Rock2 对肝癌细胞生物学活性的影响 | 第42-47页 |
| 讨论 | 第47-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 第2章 Rock2 对下游蛋白Cdc25A 的调节作用及机制 | 第50-86页 |
| 材料与方法 | 第50-71页 |
| 1 材料 | 第50-52页 |
| 2 蛋白的提取及检测 | 第52-55页 |
| 3 质粒构建步骤 | 第55-61页 |
| 4 pcDNA5-FRT-6*his-Rock2 重组质粒的构建及表达 | 第61-65页 |
| 5 Cdc25A 质粒构建及泛素质粒构建 | 第65-66页 |
| 6 免疫共沉淀 | 第66-68页 |
| 7 激光共聚焦免疫荧光实验 | 第68-69页 |
| 8 电离辐射诱导细胞 DNA 损伤 | 第69页 |
| 9 Cdk2/Cyclin E 活性检测 | 第69-71页 |
| 10 统计学分析 | 第71页 |
| 结果 | 第71-82页 |
| 1 真核重组质粒 pcDNA5-FRT-6*his-Rock2 的酶切鉴定结果 | 第71-72页 |
| 2 各组 293T 细胞中 Rock2 蛋白表达情况 | 第72页 |
| 3 Rock2 与 Cdc25A 蛋白在肝癌组织中高表达且两者呈正相关性 | 第72-74页 |
| 4 Rock2 稳定低表达细胞中 Cdc25A 蛋白表达降低 | 第74页 |
| 5 转染 Rock2 突变质粒的特异性验证 | 第74-76页 |
| 6 降低 Rock2 表达后 Chk1/Chk2 蛋白表达无明显变化 | 第76页 |
| 7 免疫共沉淀证实 Rock2 与 Cdc25A 直接相互作用 | 第76-77页 |
| 8 激光共聚焦免疫荧光证实 Rock2 与 Cdc25A 存在共定位 | 第77-78页 |
| 9 DNA 损伤时进一步证实 Rock2 对 Cdc25A 调节作用 | 第78-79页 |
| 10 对 Cdk2/Cyclin E 活性变化的影响 | 第79页 |
| 11 MG132 抑制 Cdc25A 的降解且呈剂量依赖性 | 第79-80页 |
| 12 Rock2 降低后激活泛素-蛋白酶体通路 | 第80页 |
| 13 降低 Rock2 表达后促进泛素介导的 Cdc25A 的降解 | 第80-82页 |
| 讨论 | 第82-85页 |
| 结论 | 第85-86页 |
| 第3章 Rock2 上游作用激酶的鉴定 | 第86-105页 |
| 材料与方法 | 第86-100页 |
| 1 材料 | 第86-89页 |
| 2 Rock2 磷酸化位点抗体的制备 | 第89-91页 |
| 3 电离辐射诱导 DNA 损伤 | 第91-92页 |
| 4 蛋白免疫印迹反应（Western blot） | 第92-95页 |
| 5 DpnI 法进行定点诱变 | 第95-96页 |
| 6 质粒提取 | 第96-99页 |
| 7 MTT 法检测细胞的增殖抑制情况 | 第99页 |
| 8 统计学分析 | 第99-100页 |
| 结果 | 第100-103页 |
| 1 特异性 Rock2 磷酸化位点抗体的检测 | 第100-101页 |
| 2 IR 照射时 Rock2 磷酸化位点的确定 | 第101-102页 |
| 3 明确 Rock2 的上游作用激酶 | 第102-103页 |
| 4 Rock2 磷酸化位点对肝癌细胞增殖的影响 | 第103页 |
| 讨论 | 第103-104页 |
| 结论 | 第104-105页 |
| 全文总结 | 第105-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-112页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第112-113页 |
| 综述一 | 第113-121页 |
| 参考文献 | 第118-121页 |
| 综述二 | 第121-128页 |
| 参考文献 | 第127-128页 |
