| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略语/符号说明 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-18页 |
| 研究现状、成果 | 第13-16页 |
| 研究目的、方法 | 第16-18页 |
| 材料与方法 | 第18-32页 |
| 1. 主要实验仪器 | 第18页 |
| 2. 实验材料 | 第18-20页 |
| 2.1 细胞系 | 第18页 |
| 2.2 引物、DNA合成序列及重组质粒 | 第18-19页 |
| 2.3 主要试剂 | 第19-20页 |
| 3. 实验方法 | 第20-32页 |
| 3.1 细胞转染和亚细胞系的筛选 | 第20-21页 |
| 3.1.1 细胞培养 | 第20页 |
| 3.1.2 转染质粒的准备 | 第20页 |
| 3.1.3 细胞转染 | 第20页 |
| 3.1.4 稳定亚细胞系的筛选 | 第20-21页 |
| 3.2 各亚细胞系miR-218表达水平的检测 | 第21-22页 |
| 3.2.1 总RNA的提取 | 第21页 |
| 3.2.2 miR-218表达水平的qRT-PCR检测 | 第21-22页 |
| 3.3 荧光素酶实验 | 第22-25页 |
| 3.3.1 重组荧光素酶表达质粒的构建 | 第22-24页 |
| 3.3.2 细胞分组及质粒转染 | 第24-25页 |
| 3.3.3 荧光素酶活性检测 | 第25页 |
| 3.4 Western blot检测 | 第25-26页 |
| 3.4.1 分组及细胞总蛋白的提取 | 第25-26页 |
| 3.4.2 SDS-PAGE | 第26页 |
| 3.4.3 免疫印渍 | 第26页 |
| 3.5 CDK6 mRNA的qRT-PCR检测 | 第26-27页 |
| 3.5.1 分组及总RNA样品 | 第26-27页 |
| 3.5.2 检测过程 | 第27页 |
| 3.6 免疫细胞化学检测 | 第27-28页 |
| 3.6.1 分组及细胞铺片的制备 | 第27页 |
| 3.6.2 免疫细胞化学染色 | 第27页 |
| 3.6.3 结果判读 | 第27-28页 |
| 3.7 细胞周期检测 | 第28页 |
| 3.8 体外克隆形成实验 | 第28页 |
| 3.9 凋亡检测 | 第28-29页 |
| 3.9.1 Caspase 3/7生物活性检测 | 第28-29页 |
| 3.9.2 FCM凋亡检测 | 第29页 |
| 3.10 迁移侵袭实验 | 第29-30页 |
| 3.10.1 体外迁移侵袭实验 | 第29-30页 |
| 3.10.2 定量侵袭实验 | 第30页 |
| 3.11 Matrigel 3D培养 | 第30-31页 |
| 3.12 免疫荧光检测 | 第31页 |
| 3.13 统计学方法 | 第31-32页 |
| 结果 | 第32-47页 |
| 1. 稳定过表达miR-218及无义对照序列的亚细胞系的建立 | 第32-33页 |
| 2. miR-218可在恶性胶质瘤细胞中直接抑制CDK6的表达 | 第33-34页 |
| 2.1 重组荧光素酶报导基因表达质粒的构建 | 第33页 |
| 2.2 荧光素酶实验结果 | 第33-34页 |
| 2.3 miR-218可在恶性胶质瘤细胞中抑制CDK6的表达 | 第34页 |
| 3. miR-218可有效抑制胶质母细胞瘤细胞系的增殖 | 第34-37页 |
| 3.1 各胶质母细胞瘤亚细胞系细胞增殖活性的比较 | 第34-35页 |
| 3.2 miR-218可显著降低SNB-19细胞系的克隆形成效率 | 第35-36页 |
| 3.3 miR-218可诱导胶质母细胞瘤细胞系的G_1期阻滞 | 第36-37页 |
| 4. miR-218可诱导胶质母细胞瘤细胞系的凋亡 | 第37-39页 |
| 4.1 各胶质母细胞瘤亚细胞系Caspase 3/7生物活性的比较 | 第37-38页 |
| 4.2 miR-218可明显提高U87MG及SNB-19细胞的凋亡指数 | 第38-39页 |
| 5. miR-218可抑制恶性胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力 | 第39-42页 |
| 5.1 各胶质母细胞瘤亚细胞系迁移和侵袭能力的比较 | 第39-40页 |
| 5.2 miR-218对U87MG及SNB-19细胞侵袭能力影响的定量检测结果 | 第40页 |
| 5.3 各胶质母细胞瘤亚细胞系Matrigel 3D培养结果 | 第40-42页 |
| 6. miR-218可促进恶性胶质瘤细胞的成熟分化 | 第42-47页 |
| 6.1 各胶质母细胞瘤亚细胞系CD133及Nestin表达水平的比较 | 第42页 |
| 6.2 各胶质母细胞瘤亚细胞系GFAP LI的比较 | 第42-43页 |
| 6.3 CD133及Nestin表达的免疫荧光检测结果 | 第43-47页 |
| 讨论 | 第47-54页 |
| 1. miR-218可通过诱导G_1期阻滞有效抑制恶性胶质瘤细胞的增殖 | 第47-48页 |
| 2. miR-218可阻断CDK6的表达 | 第48-49页 |
| 3. miR-218可诱导恶性胶质瘤细胞的凋亡 | 第49-50页 |
| 4. miR-218可通过阻断CDK6表达抑制恶性胶质瘤细胞的迁移侵袭 | 第50-52页 |
| 5. miR-218可通过阻断CDK6表达诱导恶性胶质瘤细胞的成熟分化 | 第52-53页 |
| 6. 结束语 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第59-60页 |
| 综述 | 第60-68页 |
| 综述参考文献 | 第65-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
