| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第11-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-53页 |
| 2.1 试验材料 | 第18页 |
| 2.1.1 供试材料 | 第18页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第18页 |
| 2.2 试验方法 | 第18-53页 |
| 2.2.1 PDA、查彼克、MS 培养基和 Hogland 营养液及主要试剂的配制 | 第18-19页 |
| 2.2.2 强致病力黄萎病菌 T5 悬浮液的准备 | 第19-20页 |
| 2.2.3 棉花苗期无杂菌定量黄萎病抗性鉴定方法及植物材料获得 | 第20页 |
| 2.2.4 棉花根系总 RNA 提取 | 第20-21页 |
| 2.2.5 棉花根系总 RNA 中基因组的去除 | 第21-22页 |
| 2.2.6 根系总 RNA 中 mRNA 分离 | 第22-23页 |
| 2.2.7 cDNA 文库构建与分析 | 第23-29页 |
| 2.2.8 文库的保存 | 第29页 |
| 2.2.9 文库的筛选 | 第29-30页 |
| 2.2.10 GbWRKY1 基因 3′端和 5′端的扩增验证 | 第30-35页 |
| 2.2.11 目的基因的生物信息学分析 | 第35页 |
| 2.2.12 GbWRKY1 基因的洋葱表皮细胞定位 | 第35-40页 |
| 2.2.13 棉花基因组 DNA 的提取及目的基因全长扩增 | 第40-42页 |
| 2.2.14 目的基因的启动子扩增 | 第42-43页 |
| 2.2.15 GbWRKY1 基因表达模式分析 | 第43-45页 |
| 2.2.16 GbWRKY1 基因植物表达载体的构建 | 第45-48页 |
| 2.2.17 真核表达载体的农杆菌转化 | 第48-49页 |
| 2.2.18 农杆菌转化拟南芥 | 第49-50页 |
| 2.2.19 拟南芥阳性植株筛选与鉴定 | 第50-52页 |
| 2.2.20 GbWRKY1 转基因拟南芥抗病性鉴定 | 第52-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-81页 |
| 3.1 棉花苗期无杂菌定量黄萎病抗性鉴定方法的建立 | 第53-55页 |
| 3.1.1 种子的消毒方法和培养基筛选结果 | 第53页 |
| 3.1.2 不同接菌方法接菌后菌丝分离结果 | 第53-54页 |
| 3.1.3 无菌苗蘸根接种黄萎病菌后抗性鉴定 | 第54-55页 |
| 3.2 接菌后海岛棉根系总 RNA 及 mRNA 获得 | 第55页 |
| 3.3 cDNA 文库的构建及质量鉴定 | 第55-60页 |
| 3.3.1 双链 cDNA 的合成、鉴定及 cDNA 的分级分离 | 第55-56页 |
| 3.3.2 原始文库的滴度及重组率测定测定 | 第56-57页 |
| 3.3.3 原始文库插入片段长度的测定 | 第57-58页 |
| 3.3.4 扩增文库滴度的测定 | 第58页 |
| 3.3.5 EST 的同源序列比较与功能注释分析 | 第58-60页 |
| 3.4 GbWRKY1 基因 cDNA 克隆 | 第60-68页 |
| 3.4.1 cDNA 文库的筛选 | 第60页 |
| 3.4.2 目的基因 5′端和 3′端序列克隆 | 第60-61页 |
| 3.4.3 GbWRKY1 的生物信息学分析 | 第61-68页 |
| 3.5 GbWRKY1 的基因组序列分析 | 第68-69页 |
| 3.6 GbWRKY1 基因的启动子分析 | 第69-70页 |
| 3.7 GbWRKYI 基因的亚细胞定位 | 第70-72页 |
| 3.7.1 目的片段的扩增及测序 | 第70-71页 |
| 3.7.2 目的基因和表达载体的连接 | 第71-72页 |
| 3.7.3 亚细胞定位 | 第72页 |
| 3.8 GbWRKY1 的表达特异性分析 | 第72-74页 |
| 3.8.1 GbWRKY1 组织表达特异性 | 第72-73页 |
| 3.8.2 黄萎病菌诱导下 GbWRKY1 表达分析 | 第73页 |
| 3.8.3 植物激素对 GbWRKY1 内源表达的影响 | 第73-74页 |
| 3.9 GbWRKY1 植物超表达和反义载体构建 | 第74-78页 |
| 3.9.1 GbWRKY1 编码区的克隆 | 第74-76页 |
| 3.9.2 pCamE-GbWRKY1 表达载体的构建 | 第76-78页 |
| 3.10 转基因拟南芥抗抗生素筛选和分子验证 | 第78-79页 |
| 3.10.1 转基因拟南芥抗生素筛选 | 第78页 |
| 3.10.2 转化植株的 PCR 检测 | 第78-79页 |
| 3.10.3 转基因拟南芥植株转录水平分析 | 第79页 |
| 3.11 转基因拟南芥抗病性鉴定 | 第79-81页 |
| 3.11.1 GbWRKY1 转基因拟南芥黄萎病抗性鉴定 | 第79-80页 |
| 3.11.2 GbWRKY1 转基因拟南芥体外抑菌鉴定 | 第80-81页 |
| 4 讨论 | 第81-85页 |
| 4.1 关于棉花苗期无杂菌定量黄萎病抗性鉴定方法 | 第81页 |
| 4.2 关于黄萎病菌诱导下的 Pima90-53 根系 cDNA 文库 | 第81-82页 |
| 4.3 关于海岛棉 GbWRKY1 | 第82-83页 |
| 4.4 关于海岛棉 GbWRKY1 在信号途径中的作用 | 第83-85页 |
| 5 结论 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-95页 |
| 附录 I 试验所用试剂配方 | 第95-96页 |
| 附录 II RACE 原理示意图 | 第96-97页 |
| 附录 III 试验中所用载体结构示意图 | 第97-98页 |
| 在读期间发表论文情况 | 第98-99页 |
| 作者简历 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
