中文摘要 | 第1-5页 |
ABSTRACT | 第5-12页 |
第一章 文献综述 | 第12-25页 |
1 干扰素概述 | 第12页 |
2 干扰素的种类及结构 | 第12-14页 |
3 干扰素的生物学活性及其机制 | 第14-19页 |
·干扰素的抗病毒作用机理 | 第14-16页 |
·干扰素的免疫调节机理 | 第16-17页 |
·干扰素抗肿瘤作用及机理 | 第17-18页 |
·干扰素与神经内分泌之间的相互作用 | 第18-19页 |
4 病毒对干扰素的抵抗 | 第19-20页 |
5 禽类干扰素研究进展 | 第20-23页 |
6 研究目的及意义 | 第23-25页 |
第二章 天府肉鸭α干扰素基因的T克隆及生物信息学分析 | 第25-50页 |
1 材料 | 第25-26页 |
·菌株/载体/实验动物 | 第25页 |
·主要试剂及配制 | 第25-26页 |
·主要仪器设备 | 第26页 |
2 实验方法 | 第26-32页 |
·引物设计 | 第26-27页 |
·鸭外周血有核细胞的分离培养及细胞总RNA的提取 | 第27-28页 |
·鸭IFN-α基因的扩增 | 第28-29页 |
·扩增产物的纯化 | 第29页 |
·PCR纯化产物与克隆载体的连接 | 第29页 |
·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
·转化 | 第30页 |
·鸭IFN-α基因阳性重组子的鉴定 | 第30-32页 |
3 结果 | 第32-46页 |
·鸭IFN-α基因的扩增 | 第32-33页 |
·鸭IFN-α基因克隆质粒pMD18-T-DuIFNα的鉴定 | 第33页 |
·生物信息学分析 | 第33-46页 |
4 讨论 | 第46-50页 |
·RNA提取 | 第46页 |
·生物信息学分析 | 第46-48页 |
·密码子偏嗜性分析 | 第48-50页 |
第三章 鸭IFN-α基因的原核表达及抗病毒活性研究 | 第50-76页 |
1 材料 | 第50-53页 |
·菌株/毒株/载体/试验动物 | 第50页 |
·主要试剂及配制 | 第50-52页 |
·主要仪器 | 第52-53页 |
2 实验方法 | 第53-63页 |
·天府肉鸭IFN-α基因的亚克隆 | 第53-55页 |
·重组蛋白的表达 | 第55-58页 |
·鸭IFN-α成熟蛋白的纯化 | 第58-59页 |
·多克隆抗体的制备及效价检测 | 第59-60页 |
·免疫兔血清的Western Blotting检测 | 第60页 |
·抗体IgG的粗提和纯化 | 第60-61页 |
·重组鸭α干扰素包涵体溶解蛋白的复性 | 第61页 |
·重组鸭α干扰素活性测定 | 第61-63页 |
3 结果 | 第63-71页 |
·天府肉鸭IFN-α基因的亚克隆 | 第63-64页 |
·重组蛋白在大肠杆菌中的表达及条件优化 | 第64-66页 |
·鸭IFN-α成熟蛋白的纯化 | 第66-67页 |
·兔抗鸭α干扰素成熟蛋白多克隆抗体效价检测 | 第67-68页 |
·抗体IgG的粗提和纯化 | 第68-69页 |
·天府肉鸭α干扰素成熟蛋白的抗病毒活性研究 | 第69-71页 |
4 讨论 | 第71-76页 |
·表达载体、宿主菌的选择和融合表达的意义 | 第71页 |
·重组蛋白的表达、纯化 | 第71-74页 |
·天府肉鸭α干扰素成熟蛋白的复性 | 第74-75页 |
·天府肉鸭α干扰素成熟蛋白的抗病毒活性研究 | 第75-76页 |
结论 | 第76-77页 |
参考文献 | 第77-83页 |
附录 | 第83-84页 |
致谢 | 第84页 |