| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 前言 | 第13-29页 |
| 1.1 海水养殖的概况及鱼类病害研究现状 | 第13-15页 |
| 1.2 海洋鱼类致病菌：鳗弧菌 | 第15-18页 |
| 1.2.1 鳗弧菌的流行病学 | 第15页 |
| 1.2.2 致病机理和毒力相关因子 | 第15-18页 |
| 1.2.2.1 黏附因子 | 第16页 |
| 1.2.2.2 外膜蛋白 | 第16-17页 |
| 1.2.2.3 细菌保外产物 ECP | 第17-18页 |
| 1.3 海水养殖的弧菌病害防治 | 第18-22页 |
| 1.3.1 药物防治 | 第18-19页 |
| 1.3.2 免疫防治 | 第19-22页 |
| 1.3.2.1 亚单位疫苗 | 第20-21页 |
| 1.3.2.2 DNA 疫苗 | 第21页 |
| 1.3.2.3 减毒疫苗 | 第21-22页 |
| 1.3.3 生态防治 | 第22页 |
| 1.4 细菌鞭毛研究进展 | 第22-27页 |
| 1.4.1 细菌鞭毛的结构 | 第22-24页 |
| 1.4.2 细菌鞭毛的运动与致病性 | 第24-25页 |
| 1.4.3 弧菌鞭毛蛋白的研究进展 | 第25-27页 |
| 1.5 本论文得研究目的和意义 | 第27-29页 |
| 2 FlaA，FlaB，FlaD，FlaE 的原核表达与分离纯化 | 第29-46页 |
| 2.1 实验材料和方法 | 第29-39页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第30-39页 |
| 2.1.2.1 常用溶液和培养基的配制方法 | 第30-33页 |
| 2.1.2.2 鞭毛蛋白 FlaA、FlaB、FlaD、FlaE 的基因克隆 | 第33-34页 |
| 2.1.2.2.1 鳗弧菌 C312 鞭毛蛋白相关引物设计 | 第33页 |
| 2.1.2.2.2 鳗弧菌 C312 基因组的提取 | 第33-34页 |
| 2.1.2.2.3 鳗弧菌 C312 鞭毛蛋白基因序列扩增 | 第34页 |
| 2.1.2.3 重组表达质粒的构建 | 第34-36页 |
| 2.1.2.3.1 鞭毛蛋白基因序列测序 | 第34-35页 |
| 2.1.2.3.2 鞭毛蛋白表达质粒构建 | 第35-36页 |
| 2.1.2.4 重组鞭毛蛋白的诱导表达 | 第36-39页 |
| 2.1.2.4.1 蛋白重组表达菌株的构建 | 第36-37页 |
| 2.1.2.4.2 rFlaA，rFlaB，rFlaD，rFlaE 的小量诱导表达 | 第37页 |
| 2.1.2.4.3 rFlaA、rFlaB、rFlaD、rFlaE 的分离纯化 | 第37-39页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第39-46页 |
| 2.2.1 鞭毛蛋白 FlaA、FlaB、FlaD、FlaA 的基因克隆 | 第39-41页 |
| 2.2.1.1 鳗弧菌 C312 基因组提取 | 第39页 |
| 2.2.1.2 flaA, flaB, flaD, flaE 基因扩增 | 第39-41页 |
| 2.2.2 重组表达质粒的构建 | 第41-43页 |
| 2.2.3 重组鞭毛蛋白的诱导表达与分离纯化 | 第43-46页 |
| 3 rFlaA，rFlaB，rFlaD，rFlaE 的免疫原性比较研究 | 第46-57页 |
| 3.1 实验材料和方法 | 第46-51页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.1.1.1 实验菌株与质粒 | 第46页 |
| 3.1.1.2 实验动物 | 第46页 |
| 3.1.1.3 实验试剂 | 第46-47页 |
| 3.1.1.4 实验仪器 | 第47页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第47-51页 |
| 3.1.2.1 大鼠抗鳗弧菌的全菌抗血清制备 | 第47-48页 |
| 3.1.2.1.1 大鼠抗灭活鳗弧菌 C312 全菌抗体 | 第47-48页 |
| 3.1.2.1.2 大鼠抗活鳗弧菌 C312 全菌抗体 | 第48页 |
| 3.1.2.2 疫苗接种研究 | 第48-49页 |
| 3.1.2.3 酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第49-50页 |
| 3.1.2.3.1 检测细菌全菌血清效价 | 第49-50页 |
| 3.1.2.3.2 检测鱼抗的抗体效价 | 第50页 |
| 3.1.2.4 抗血清在细胞水平抑制细菌侵染的研究 | 第50-51页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第51-56页 |
| 3.2.1 四种鞭毛蛋白的免疫原性 | 第51-52页 |
| 3.2.2 四种鞭毛蛋白免疫保护率的比较研究 | 第52-54页 |
| 3.2.3 四种鞭毛蛋白抗血清抗体的产生 | 第54页 |
| 3.2.4 鞭毛蛋白抗血清抑制细菌侵染的作用 | 第54-56页 |
| 3.3 小结 | 第56-57页 |
| 4 rFlaA，rFlaB，rFlaD，rFlaE 的佐剂效应比较研究 | 第57-66页 |
| 4.1 实验材料和方法 | 第57-60页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第57-58页 |
| 4.1.1.1 实验菌株与质粒 | 第57页 |
| 4.1.1.2 实验动物 | 第57页 |
| 4.1.1.3 实验试剂 | 第57-58页 |
| 4.1.1.4 实验仪器 | 第58页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第58-60页 |
| 4.1.2.1 四种鞭毛蛋白佐剂效应保护率检测 | 第58页 |
| 4.1.2.2 Real-Time PCR 检测免疫相关基因的表达 | 第58-60页 |
| 4.1.2.2.1 RNA 的提取 | 第59页 |
| 4.1.2.2.2 RNA 反转录 | 第59-60页 |
| 4.1.2.2.3 Real-Time PCR 检测 | 第60页 |
| 4.2 实验结果与讨论 | 第60-64页 |
| 4.2.1 四种鞭毛蛋白的佐剂效应比较 | 第60-61页 |
| 4.2.2 rFlaE 在 rEsal 在免疫应答过程中的作用 | 第61-64页 |
| 4.2.2.1 rFlaE 在抗体产生过程中的作用 | 第61-62页 |
| 4.2.2.2 rFlaE 对免疫相关基因表达的影响 | 第62-64页 |
| 4.2.3 讨论 | 第64页 |
| 4.3 小结 | 第64-66页 |
| 5 小结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 个人简历和论文发表情况 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
