| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 1 绪论 | 第12-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-24页 |
| 2.1 材料 | 第16-17页 |
| 2.1.1 主要材料和试剂 | 第16页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.1.3 引物序列 | 第17页 |
| 2.2 方法 | 第17-23页 |
| 2.2.1 HEK293细胞的培养及处理 | 第17页 |
| 2.2.2 转化 | 第17-18页 |
| 2.2.3 质粒的提取 | 第18页 |
| 2.2.4 pEGFP-MIPU1真核表达质粒酶切鉴定 | 第18页 |
| 2.2.5 pEGFP-MIPU1质粒测序 | 第18-19页 |
| 2.2.6 脂质体介导的瞬时转染 | 第19页 |
| 2.2.7 细胞总RNA提取 | 第19页 |
| 2.2.8 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)步骤 | 第19-20页 |
| 2.2.9 BCA蛋白定量 | 第20-21页 |
| 2.2.10 细胞总蛋白的提取和蛋白质免疫印迹分析 | 第21页 |
| 2.2.11 Hoechst33258染核,检测细胞核凋亡形态及凋亡百分率计算 | 第21页 |
| 2.2.12 MTT检测细胞存活率 | 第21-22页 |
| 2.2.13 流式细胞数检测细胞凋亡 | 第22页 |
| 2.2.14 Caspase-3活性检测 | 第22-23页 |
| 2.2.15 双荧光素酶报告基因检测 | 第23页 |
| 2.3 结果分析 | 第23-24页 |
| 3 实验结果 | 第24-45页 |
| 3.1 DOX对HEK293细胞中MIPU1表达的影响 | 第24-25页 |
| 3.2 检测MIPU1的转染效率 | 第25-28页 |
| 3.2.1 MIPU1真核表达质粒的酶切鉴定 | 第25页 |
| 3.2.2 质粒测序结果 | 第25-26页 |
| 3.2.3 MIPU1的转染与表达 | 第26-28页 |
| 3.3 MIPU1对DOX所致细胞存活率的影响 | 第28-30页 |
| 3.3.1 MTT检测不同浓度DOX处理HEK293细胞24h对细胞活性的影响 | 第28-29页 |
| 3.3.2 MTT检测过表达MIPU1对细胞存活率的影响 | 第29-30页 |
| 3.4 MIPU1过表达对DOX所致细胞凋亡的影响 | 第30-34页 |
| 3.4.1 Hoechst33258染核观察过表达MIPU1后细胞凋亡的变化情况 | 第30-31页 |
| 3.4.2 流式细胞术检测1μDOX处理后的细胞凋亡率 | 第31-32页 |
| 3.4.3 流式细胞术检测MIPU1过表达对细胞凋亡率的影响 | 第32-34页 |
| 3.4.4 检测MIPU1过表达对Caspase-3活性的影响 | 第34页 |
| 3.5 MIPU1过表达对DOX所致Bcl-2表达的影响 | 第34-37页 |
| 3.5.1 不同浓度DOX处理HEK293细胞24小时后Bcl-2蛋白的表达变化 | 第34-35页 |
| 3.5.2 1μMDOX处理HEK293细胞不同时间点后Bcl-2蛋白的表达变化 | 第35-36页 |
| 3.5.3 过表达MIPU1对DOX所致Bcl-2在mRNA水平上的变化 | 第36页 |
| 3.5.4 MIPU1过表达在蛋白水平上对Bcl-2的表达变化 | 第36-37页 |
| 3.6 过表达MIPU1对P53表达的影响 | 第37-40页 |
| 3.6.1 浓度DOX处理后p53在蛋白水平上的变化 | 第37-38页 |
| 3.6.2 观察在DOX刺激下P53在mRNA水平上的变化 | 第38页 |
| 3.6.3 MIPU1过表达后对DOX所致P53的mRNA表达的影响 | 第38-39页 |
| 3.6.4 MIPU1过表达对DOX所致p53蛋白表达水平的影响 | 第39-40页 |
| 3.7 MIPU1过表达对Bax表达的影响 | 第40-45页 |
| 3.7.1 不同浓度DOX处理HEK293细胞24小时后Bax蛋白的表达变化 | 第40页 |
| 3.7.2 1μgM DOX处理HEK293细胞不同时间点后Bax蛋白的表达变化 | 第40-41页 |
| 3.7.3 MIPUl过表达对DOX所致Bax在mRNA水平上表达的变化 | 第41-42页 |
| 3.7.4 Western blot检测MIPU1过表达对DOX所致Bax在蛋白水平上的表达变化 | 第42-43页 |
| 3.7.5 双荧光素酶报告基因检测MIPU1对Bax基因是否存在转录调控作用 | 第43-45页 |
| 4 分析与讨论 | 第45-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 综述 | 第53-64页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 附录 | 第64-69页 |
| 攻读学位期间主要研究成果 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
