| 中文摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 英文缩写词表 | 第12-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-15页 |
| 1.1 研究的目的意义 | 第13页 |
| 1.2 研究的主要内容 | 第13-14页 |
| 1.3 研究的技术路线 | 第14-15页 |
| 第2章 文献综述 | 第15-23页 |
| 2.1 干扰素研究概况 | 第15-23页 |
| 2.1.1 IFN的起源、分布、发现和分类 | 第15-16页 |
| 2.1.2 IFN的理化性质和分子结构 | 第16页 |
| 2.1.3 IFN的活性与作用机制 | 第16-19页 |
| 2.1.4 IFN基因工程研究进展 | 第19-20页 |
| 2.1.5 重组犬IFN的研究进展 | 第20-22页 |
| 2.1.6 展望 | 第22-23页 |
| 第3章 毕赤酵母表达系统研究进展 | 第23-32页 |
| 3.1 PICHIA PASTORIS表达系统的优越性 | 第23-24页 |
| 3.2 PICHIA PASTORIS表达系统的组成和最新研究进展 | 第24-26页 |
| 3.3 PICHIA PASTORIS表达载体启动子与分泌信号的研究进展 | 第26-29页 |
| 3.4 PICHIA PASTORIS宿主菌株研究进展 | 第29-30页 |
| 3.5 PICHIA PASTORIS表达IFN的研究进展 | 第30-31页 |
| 3.6 展望 | 第31-32页 |
| 第4章 研究内容 | 第32-61页 |
| 前言 | 第32-36页 |
| 4.1 方法 | 第36-43页 |
| 4.1.1 α-分泌信号突变型表达载体构建策略与引物设计 | 第36-38页 |
| 4.1.2 PCR扩增目的基因 | 第38-39页 |
| 4.1.3 PCR扩增DNA片段的回收与鉴定 | 第39页 |
| 4.1.4 pPIC9K载体的扩增 | 第39-40页 |
| 4.1.5 扩增DNA片段的酶切与连接 | 第40页 |
| 4.1.6 连接产物的转化与鉴定 | 第40-41页 |
| 4.1.7 表达载体转化Pichia Pastoris GS115 | 第41-43页 |
| 4.2 结果 | 第43-46页 |
| 4.2.1 PCR扩增CaIFN-a1及分泌信号DNA | 第43-44页 |
| 4.2.2 重组质粒的酶切鉴定 | 第44-45页 |
| 4.2.3 重组质粒测序结果 | 第45页 |
| 4.2.4 多拷贝插入重组子的筛选 | 第45页 |
| 4.2.5 转化子的PCR鉴定 | 第45-46页 |
| 4.3 讨论 | 第46-48页 |
| 4.4 方法 | 第48-50页 |
| 4.4.1 重组Pichia pastoris（His~+ Mut~+表型）的诱导表达 | 第48页 |
| 4.4.2 硫酸铵沉淀总蛋白 | 第48页 |
| 4.4.3 总蛋白浓度测定 | 第48-49页 |
| 4.4.4 靶蛋白（CaIFN-α1）含量测定 | 第49-50页 |
| 4.4.5 统计学处理 | 第50页 |
| 4.5 结果 | 第50-52页 |
| 4.5.1 表达产物的总蛋白浓度 | 第50-51页 |
| 4.5.2 靶蛋白（CaIFN-α1）含量 | 第51-52页 |
| 4.6 讨论 | 第52-53页 |
| 4.7 方法 | 第53-55页 |
| 4.7.1 SDS-PAGE分析 | 第53页 |
| 4.7.2 生物学活性分析 | 第53-55页 |
| 4.8 结果 | 第55-58页 |
| 4.8.1 SDS-PAGE结果 | 第55-56页 |
| 4.8.2 犬干扰素α1 的生物学活性 | 第56-58页 |
| 4.9 讨论 | 第58-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
