缩略词表 | 第1-7页 |
中文摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-12页 |
前言 | 第12-15页 |
材料与方法 | 第15-37页 |
一、实验材料 | 第15-17页 |
1、实验试剂与药品 | 第15-16页 |
2、实验仪器 | 第16-17页 |
二、实验动物模型与分组 | 第17-18页 |
1、实验动物模型 | 第17-18页 |
2、实验分组 | 第18页 |
三、标本采集与处理 | 第18页 |
四、实验方法 | 第18-35页 |
1、脾脏组织 HE 染色光镜观察 | 第18-19页 |
2、脾脏组织免疫荧光染色标记 CD11c+DC 数量 | 第19页 |
3、小鼠脾脏 DC 的分离与提取 | 第19-21页 |
4、小鼠胸腺 T 淋巴细胞的分离与提取 | 第21页 |
5、流式细胞术检测分离细胞纯度及 DC 凋亡率和表面 CD86、MHC-Ⅱ | 第21-22页 |
6、Real-Time PCR 检测各种因子 mRNA 水平的表达 | 第22-26页 |
7、Western Blot 检测 MHC-Ⅱ和 MARCH1 蛋白的表达 | 第26-29页 |
8、免疫共沉淀检测 MHC-Ⅱ蛋白的泛素化水平 | 第29页 |
9、pMB-HA-MARCH1 真核表达载体的构建 | 第29-34页 |
10、pMB-HA-MARCH1 真核表达载体和 SiRNA 的脂质体转染进 DC | 第34页 |
11、Annexin-V/PI 双标记染色法检测 DC 凋亡率 | 第34页 |
12、MTT 法检测 T 细胞增殖活性 | 第34-35页 |
五、统计学分析 | 第35-37页 |
结果 | 第37-87页 |
第一部分:小鼠 MODS 病程中脾脏 DC MHC-Ⅱ蛋白的泛素相关性研究 | 第37-63页 |
一、MODS 病程中小鼠生理体征的变化 | 第37-38页 |
二、MODS 病程中小鼠脾脏 DC 的变化 | 第38-52页 |
1、MODS 病程中小鼠脾脏组织病理学的变化 | 第38-39页 |
2、MODS 病程中小鼠脾脏 CD11c+DC 数量的变化 | 第39-41页 |
3、MODS 病程中小鼠脾脏 DC 表面分子和分泌因子的变化 | 第41-49页 |
4、MODS 病程中小鼠脾脏 DC 对 T 细胞功能影响的变化 | 第49-52页 |
三、MODS 病程中小鼠脾脏 DC 泛素和 E3 泛素连接酶表达的变化 | 第52-63页 |
1、MODS 病程中小鼠脾脏 DC 泛素 mRNA 表达的变化 | 第52-53页 |
2、MODS 病程中小鼠脾脏 DC E3 泛素连接酶(MARCH1-8)mRNA 表达的变化 | 第53-61页 |
3、MODS 病程中小鼠脾脏 DC MARCH1 蛋白表达的变化 | 第61-63页 |
4、MODS 病程中 MARCH1 与 MHC-Ⅱ蛋白表达的比较 | 第63页 |
第二部分:脾脏 DC MHC-Ⅱ蛋白泛素化的分子机制及干预研究 | 第63-87页 |
一、MODS 1d 组 DC MHC-Ⅱ蛋白水平变化的泛素依赖性 | 第63-71页 |
1、MODS 1d 组 DC MHC-Ⅱ蛋白泛素化水平的变化 | 第63-64页 |
2、正常对照组及 MODS 1d 组 DC 经 MG132 处理前后 MHC-Ⅱ的变化 | 第64-68页 |
3、正常对照组及 MODS 1d 组 DC 经 MG132 处理前后对 T 细胞影响的变化 | 第68-71页 |
二、pMB-HA-MARCH1 真核表达载体和 MARCH1 siRNA 的构建 | 第71-75页 |
1、pMB-HA-MARCH1 真核表达载体的构建 | 第71-74页 |
2、MARCH1 siRNA 的构建 | 第74-75页 |
三、干预 MARCH1 对 MODS 1d 组 MHC-Ⅱ及 DC 免疫功能影响的变化 | 第75-87页 |
1、干预 MARCH1 对 MODS 1d 组 DC 基本生理状况影响的变化 | 第75-78页 |
2、干预 MARCH1 对 MODS 1d 组 DC MHC-Ⅱ影响的变化 | 第78-82页 |
3、干预 MARCH1 对 MODS 1d 组 DC 对 T 细胞功能影响的变化 | 第82-87页 |
讨论 | 第87-99页 |
一、小鼠 MODS 模型中脾脏 DC 的变化与意义 | 第87-90页 |
1、关于小鼠 MODS 模型的应用与评价 | 第87-88页 |
2、MODS 病程中脾脏 DC 分化、成熟及免疫功能的变化与意义 | 第88-90页 |
二、MODS 中脾脏 DC MHC-Ⅱ的变化规律 | 第90页 |
三、在 MODS 病程中泛素-蛋白酶体途径对脾脏 DC MHC-Ⅱ蛋白水平变化的影响作用 | 第90-94页 |
1、MODS 病程中脾脏 DC 泛素 mRNA 水平表达的变化规律 | 第91页 |
2、MODS 病程中脾脏 DC E3 泛素连接酶 mRNA 和蛋白水平表达的变化规律 | 第91-93页 |
3、MODS 病程中 MARCH1 与 MHC-Ⅱ蛋白表达的比较 | 第93-94页 |
四、MODS 第一次打击期脾脏 DC MHC-Ⅱ蛋白水平变化的分子机制探讨及干预效应 | 第94-99页 |
1、MODS 1d 组脾脏 DC MHC-Ⅱ蛋白泛素化水平的变化 | 第94页 |
2、MODS 1d 组脾脏 DC MHC-Ⅱ泛素化降解途径的分子效应 | 第94-95页 |
3、关于 pMB-HA-MARCH1 真核表达载体和 MARCH1 siRNA 的构建与应用 | 第95-96页 |
4、干预 MARCH1 对 MODS 1d 组脾脏 DC MHC-Ⅱ蛋白水平及泛素化程度的影响 | 第96-97页 |
5、干预 MARCH1 对 MODS 1d 组脾脏 DC 免疫功能的影响 | 第97-99页 |
结论 | 第99-101页 |
参考文献 | 第101-109页 |
综述 | 第109-113页 |
个人简历 | 第113-115页 |
致谢 | 第115页 |