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泛素化对多器官功能障碍综合征脾脏树突状细胞功能的调节作用与机制研究

缩略词表第1-7页
中文摘要第7-9页
Abstract第9-12页
前言第12-15页
材料与方法第15-37页
 一、实验材料第15-17页
  1、实验试剂与药品第15-16页
  2、实验仪器第16-17页
 二、实验动物模型与分组第17-18页
  1、实验动物模型第17-18页
  2、实验分组第18页
 三、标本采集与处理第18页
 四、实验方法第18-35页
  1、脾脏组织 HE 染色光镜观察第18-19页
  2、脾脏组织免疫荧光染色标记 CD11c+DC 数量第19页
  3、小鼠脾脏 DC 的分离与提取第19-21页
  4、小鼠胸腺 T 淋巴细胞的分离与提取第21页
  5、流式细胞术检测分离细胞纯度及 DC 凋亡率和表面 CD86、MHC-Ⅱ第21-22页
  6、Real-Time PCR 检测各种因子 mRNA 水平的表达第22-26页
  7、Western Blot 检测 MHC-Ⅱ和 MARCH1 蛋白的表达第26-29页
  8、免疫共沉淀检测 MHC-Ⅱ蛋白的泛素化水平第29页
  9、pMB-HA-MARCH1 真核表达载体的构建第29-34页
  10、pMB-HA-MARCH1 真核表达载体和 SiRNA 的脂质体转染进 DC第34页
  11、Annexin-V/PI 双标记染色法检测 DC 凋亡率第34页
  12、MTT 法检测 T 细胞增殖活性第34-35页
 五、统计学分析第35-37页
结果第37-87页
 第一部分:小鼠 MODS 病程中脾脏 DC MHC-Ⅱ蛋白的泛素相关性研究第37-63页
  一、MODS 病程中小鼠生理体征的变化第37-38页
  二、MODS 病程中小鼠脾脏 DC 的变化第38-52页
   1、MODS 病程中小鼠脾脏组织病理学的变化第38-39页
   2、MODS 病程中小鼠脾脏 CD11c+DC 数量的变化第39-41页
   3、MODS 病程中小鼠脾脏 DC 表面分子和分泌因子的变化第41-49页
   4、MODS 病程中小鼠脾脏 DC 对 T 细胞功能影响的变化第49-52页
  三、MODS 病程中小鼠脾脏 DC 泛素和 E3 泛素连接酶表达的变化第52-63页
   1、MODS 病程中小鼠脾脏 DC 泛素 mRNA 表达的变化第52-53页
   2、MODS 病程中小鼠脾脏 DC E3 泛素连接酶(MARCH1-8)mRNA 表达的变化第53-61页
   3、MODS 病程中小鼠脾脏 DC MARCH1 蛋白表达的变化第61-63页
   4、MODS 病程中 MARCH1 与 MHC-Ⅱ蛋白表达的比较第63页
 第二部分:脾脏 DC MHC-Ⅱ蛋白泛素化的分子机制及干预研究第63-87页
  一、MODS 1d 组 DC MHC-Ⅱ蛋白水平变化的泛素依赖性第63-71页
   1、MODS 1d 组 DC MHC-Ⅱ蛋白泛素化水平的变化第63-64页
   2、正常对照组及 MODS 1d 组 DC 经 MG132 处理前后 MHC-Ⅱ的变化第64-68页
   3、正常对照组及 MODS 1d 组 DC 经 MG132 处理前后对 T 细胞影响的变化第68-71页
  二、pMB-HA-MARCH1 真核表达载体和 MARCH1 siRNA 的构建第71-75页
   1、pMB-HA-MARCH1 真核表达载体的构建第71-74页
   2、MARCH1 siRNA 的构建第74-75页
  三、干预 MARCH1 对 MODS 1d 组 MHC-Ⅱ及 DC 免疫功能影响的变化第75-87页
   1、干预 MARCH1 对 MODS 1d 组 DC 基本生理状况影响的变化第75-78页
   2、干预 MARCH1 对 MODS 1d 组 DC MHC-Ⅱ影响的变化第78-82页
   3、干预 MARCH1 对 MODS 1d 组 DC 对 T 细胞功能影响的变化第82-87页
讨论第87-99页
 一、小鼠 MODS 模型中脾脏 DC 的变化与意义第87-90页
  1、关于小鼠 MODS 模型的应用与评价第87-88页
  2、MODS 病程中脾脏 DC 分化、成熟及免疫功能的变化与意义第88-90页
 二、MODS 中脾脏 DC MHC-Ⅱ的变化规律第90页
 三、在 MODS 病程中泛素-蛋白酶体途径对脾脏 DC MHC-Ⅱ蛋白水平变化的影响作用第90-94页
  1、MODS 病程中脾脏 DC 泛素 mRNA 水平表达的变化规律第91页
  2、MODS 病程中脾脏 DC E3 泛素连接酶 mRNA 和蛋白水平表达的变化规律第91-93页
  3、MODS 病程中 MARCH1 与 MHC-Ⅱ蛋白表达的比较第93-94页
 四、MODS 第一次打击期脾脏 DC MHC-Ⅱ蛋白水平变化的分子机制探讨及干预效应第94-99页
  1、MODS 1d 组脾脏 DC MHC-Ⅱ蛋白泛素化水平的变化第94页
  2、MODS 1d 组脾脏 DC MHC-Ⅱ泛素化降解途径的分子效应第94-95页
  3、关于 pMB-HA-MARCH1 真核表达载体和 MARCH1 siRNA 的构建与应用第95-96页
  4、干预 MARCH1 对 MODS 1d 组脾脏 DC MHC-Ⅱ蛋白水平及泛素化程度的影响第96-97页
  5、干预 MARCH1 对 MODS 1d 组脾脏 DC 免疫功能的影响第97-99页
结论第99-101页
参考文献第101-109页
综述第109-113页
个人简历第113-115页
致谢第115页

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