| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-26页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-14页 |
| 1.2 糖苷水解酶概述 | 第14页 |
| 1.3 β-葡萄糖苷酶及其应用 | 第14-18页 |
| 1.3.1 β-葡萄糖苷酶的来源与分类 | 第14-15页 |
| 1.3.2 β-葡萄糖苷酶催化机制 | 第15-16页 |
| 1.3.3 β-葡萄糖苷酶的应用 | 第16-18页 |
| 1.4 木聚糖酶及其应用 | 第18-21页 |
| 1.4.1 木聚糖酶的来源与分类 | 第18-19页 |
| 1.4.2 木聚糖酶催化机制 | 第19页 |
| 1.4.3 木聚糖酶的应用 | 第19-21页 |
| 1.5 适冷酶的研究 | 第21-23页 |
| 1.6 耐盐酶的研究 | 第23页 |
| 1.7 本课题的研究目的、意义及内容 | 第23-25页 |
| 1.8 本课题的研究路线 | 第25-26页 |
| 第二章 B. cellulosilyticus来源的 β-葡萄糖苷酶克隆与表达 | 第26-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第26页 |
| 2.1.2 主要培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.3 实验仪器与试剂溶液 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-34页 |
| 2.2.1 提取B. cellulosilyticus DSM 2522 的基因组DNA | 第28页 |
| 2.2.2 引物的设计与合成 | 第28-29页 |
| 2.2.3 PCR扩增目的基因 | 第29页 |
| 2.2.4 PCR产物检测 | 第29-30页 |
| 2.2.5 BcBGlA基因克隆与重组表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.6 重组表达质粒的转化 | 第31-32页 |
| 2.2.7 重组 β-葡萄糖苷酶基因的诱导表达 | 第32-33页 |
| 2.2.8 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第33-34页 |
| 2.3 测定方法 | 第34-36页 |
| 2.3.1 蛋白质浓度的测定 | 第34-35页 |
| 2.3.2 酶活测定 | 第35-36页 |
| 2.4 结果与分析 | 第36-37页 |
| 2.4.1 重组表达载体的鉴定 | 第36页 |
| 2.4.2 BcBGlA在E. coli BL21中的诱导表达 | 第36-37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 重组BcBGlA的分离纯化和酶学性质研究 | 第38-52页 |
| 3.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第38页 |
| 3.1.2 主要培养基与试剂溶液 | 第38-39页 |
| 3.1.3 主要实验试剂及其他 | 第39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-43页 |
| 3.2.1 重组BcBGlA的纯化 | 第39-41页 |
| 3.2.2 重组BcBGlA的性质研究 | 第41-43页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第43-50页 |
| 3.3.1 重组BcBGlA的纯化 | 第43页 |
| 3.3.2 pH对重组BcBGlA活性的影响 | 第43-45页 |
| 3.3.3 温度对重组BcBGlA活性的影响 | 第45-46页 |
| 3.3.4 金属离子和其他化学试剂对重组BcBGlA活性的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.5 重组BcBGlA对葡萄糖的耐受性研究 | 第47-48页 |
| 3.3.6 重组BcBGlA对NaCl的耐受性研究 | 第48-49页 |
| 3.3.7 重组BcBGlA的底物特异性和动力学性质研究 | 第49-50页 |
| 3.4 本章小结 | 第50-52页 |
| 第四章 B. cellulosilyticus来源的木聚糖酶的克隆与表达 | 第52-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第52-53页 |
| 4.1.1 菌种和质粒 | 第52页 |
| 4.1.2 主要培养基与试剂溶液 | 第52-53页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-55页 |
| 4.2.1 B. cellulosilyticus基因组DNA的提取 | 第53页 |
| 4.2.2 引物的设计与合成 | 第53页 |
| 4.2.3 PCR扩增目的基因 | 第53-54页 |
| 4.2.4 PCR产物检测 | 第54页 |
| 4.2.5 Xyn10A基因的克隆与重组表达载体的构建与转化 | 第54-55页 |
| 4.2.6 重组Xyn10A基因的诱导表达 | 第55页 |
| 4.3 测定方法 | 第55-56页 |
| 4.3.1 蛋白质浓度的测定 | 第55页 |
| 4.3.2 酶活测定 | 第55-56页 |
| 4.4 结果与分析 | 第56-59页 |
| 4.4.1 Xyn10A同源性分析 | 第56-58页 |
| 4.4.2 重组表达载体的鉴定 | 第58页 |
| 4.4.3 Xyn10A在E.coli BL21（DE3）中的诱导表达 | 第58-59页 |
| 4.5 本章小结 | 第59-60页 |
| 第五章 重组Xyn10A的分离纯化和酶学性质研究 | 第60-71页 |
| 5.1 实验材料 | 第60-61页 |
| 5.1.1 菌株与质粒 | 第60页 |
| 5.1.2 主要培养基与试剂溶液 | 第60页 |
| 5.1.3 主要实验试剂及其他 | 第60-61页 |
| 5.2 实验方法 | 第61-63页 |
| 5.2.1 重组Xyn10A的纯化 | 第61页 |
| 5.2.2 重组Xyn10A性质研究 | 第61-63页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第63-69页 |
| 5.3.1 重组Xyn10A的纯化 | 第63页 |
| 5.3.2 pH对重组Xyn10A活性的影响 | 第63-65页 |
| 5.3.3 温度对重组Xyn10A活性的影响 | 第65-66页 |
| 5.3.4 金属离子和其他化学试剂对重组Xyn10A活性的影响 | 第66-67页 |
| 5.3.5 重组Xyn10A对NaCl的耐受性研究 | 第67页 |
| 5.3.6 底物浓度对重组Xyn10A活性的影响 | 第67-68页 |
| 5.3.7 重组Xyn10A的底物特异性和降解木聚糖的产物分析 | 第68-69页 |
| 5.4 本章小结 | 第69-71页 |
| 第六章 结论与展望 | 第71-73页 |
| 6.1 结论 | 第71-72页 |
| 6.2 展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 硕士期间发表的学术论文 | 第86页 |
