| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 中英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 奶牛乳腺炎的概况 | 第12-14页 |
| 1.1.1 奶牛乳腺炎的发生 | 第12页 |
| 1.1.2 奶牛乳腺炎的症状和分类 | 第12-13页 |
| 1.1.3 奶牛乳腺炎的危害 | 第13-14页 |
| 1.1.4 奶牛乳腺炎的预防和治疗 | 第14页 |
| 1.2 单核苷酸多态性 | 第14-15页 |
| 1.2.1 SNP的概念 | 第14页 |
| 1.2.2 SNP的检测方法 | 第14-15页 |
| 1.2.3 SNP的应用 | 第15页 |
| 1.3 启动子 | 第15-16页 |
| 1.3.1 启动子概念 | 第15页 |
| 1.3.2 真核启动子类型 | 第15页 |
| 1.3.3 启动子的特征 | 第15-16页 |
| 1.4 MicroRNA | 第16-17页 |
| 1.4.1 miRNA的概念 | 第16页 |
| 1.4.2 miRNA 的特性和检测方法 | 第16页 |
| 1.4.3 miRNA的生成与原理 | 第16页 |
| 1.4.4 miRNA的功能分析 | 第16-17页 |
| 1.5 可变剪切 | 第17-18页 |
| 1.5.1 可变剪切的概念 | 第17页 |
| 1.5.2 可变剪切的分类 | 第17页 |
| 1.5.3 可变剪切的作用和生物学意义 | 第17页 |
| 1.5.4 可变剪切的调控 | 第17-18页 |
| 1.5.5 可变剪切的研究方法 | 第18页 |
| 1.6 CCL5基因研究进展 | 第18-21页 |
| 1.6.1 CCL5的结构 | 第19页 |
| 1.6.2 CCL5的受体 | 第19页 |
| 1.6.3 CCL5的表达 | 第19-20页 |
| 1.6.4 CCL5基因多态性及生物学影响 | 第20页 |
| 1.6.5 CCL5基因的研究进展及意义 | 第20-21页 |
| 第2章 CCL5基因可变剪切体及功能性SNPs的鉴定 | 第21-34页 |
| 2.1 试验材料和设备试剂 | 第21页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 试验设备和试剂 | 第21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-26页 |
| 2.2.1 组织样品总RNA的提取和cDNA的合成 | 第21-22页 |
| 2.2.2 CCL5基因编码区克隆测序 | 第22-23页 |
| 2.2.3 荧光定量PCR | 第23-24页 |
| 2.2.4 CCL5基因可变剪切相关SNP检测与分型 | 第24-25页 |
| 2.2.5 PSPL3外显子捕获载体质粒构建 | 第25页 |
| 2.2.6 细胞瞬时转染和双荧光素酶活性检测 | 第25-26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-32页 |
| 2.3.1 组织样品RNA的质量检测 | 第26-27页 |
| 2.3.2 可变剪切体的鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.3 CCL5基因mRNA的差异表达 | 第28-29页 |
| 2.3.4 功能性SNP的鉴定 | 第29-31页 |
| 2.3.5 pSPL3外显子捕获载体质粒构建 | 第31页 |
| 2.3.6 验证SNP对可变剪切体产生的影响 | 第31-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-34页 |
| 第3章 CCL5基因启动子活性分析及功能性SNPs的鉴定 | 第34-45页 |
| 3.1 试验材料和设备试剂 | 第34页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第34页 |
| 3.1.2 试验设备和试剂 | 第34页 |
| 3.2 试验方法 | 第34-39页 |
| 3.2.1 DNA提取及检测 | 第34页 |
| 3.2.2 启动子区域的生物信息方法预测 | 第34-35页 |
| 3.2.3 CCL5基因启动子区载体构建和鉴定 | 第35-37页 |
| 3.2.4 瞬时转染细胞及荧光分析 | 第37-38页 |
| 3.2.5 启动子区SNP检测和分型 | 第38页 |
| 3.2.6 数据统计分析 | 第38-39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-43页 |
| 3.3.1 DNA检测 | 第39页 |
| 3.3.2 CCL5基因启动子生物信息学预测分析 | 第39-41页 |
| 3.3.3 CCL5基因核心启动子的确定 | 第41页 |
| 3.3.4 CCL5基因启动子区功能性SNP的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3.5 CCL5基因不同基因型与产奶性状的关联分析 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-45页 |
| 第4章 影响bta-miR-2295 与靶标CCL5靶结合能力的功能性SNPs的鉴定 | 第45-52页 |
| 4.1 试验材料和设备试剂 | 第45页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第45页 |
| 4.1.2 试验设备和试剂 | 第45页 |
| 4.2 试验方法 | 第45-48页 |
| 4.2.1 CCL5基因 3’UTR的SNP鉴定 | 第45-46页 |
| 4.2.2 CCL5基因 3’UTR的靶向miRNA预测及生物信息学分析 | 第46页 |
| 4.2.3 CCL5基因 3’UTR和miRNA载体构建 | 第46-47页 |
| 4.2.4 瞬时转染细胞及荧光分析 | 第47页 |
| 4.2.5 基因分型 | 第47页 |
| 4.2.6 数据统计分析 | 第47-48页 |
| 4.3 结果与分析 | 第48-51页 |
| 4.3.1 CCL5基因 3'UTR片段SNP的鉴定及生物信息学分析 | 第48-49页 |
| 4.3.2 双荧光素酶活性分析 | 第49页 |
| 4.3.3 PCR-RFLP分析 | 第49-50页 |
| 4.3.4 CCL5基因不同基因型与与奶牛产奶性状的相关性分析 | 第50-51页 |
| 4.4 讨论 | 第51-52页 |
| 全文总结 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 附录 | 第60-62页 |
| 作者简介 | 第62-63页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文和参研的项目 | 第63-64页 |
