| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRSCT | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-31页 |
| 1.1 微生物法降解尼古丁研究进展 | 第13-19页 |
| 1.1.1 降解尼古丁的微生物种类 | 第13-14页 |
| 1.1.2 微生物代谢尼古丁的途径研究 | 第14-19页 |
| 1.2 尼古丁去甲基化反应机制研究进展 | 第19-20页 |
| 1.3 细胞色素P450单加氧酶 | 第20-21页 |
| 1.4 膜蛋白的纯化 | 第21-22页 |
| 1.5 转录组学概述 | 第22-23页 |
| 1.6 转录组学研究的基本方法 | 第23-29页 |
| 1.6.1 表达序列标签(EST)技术 | 第23-24页 |
| 1.6.2 基因芯片技术 | 第24-26页 |
| 1.6.3 利用RNA-Seq技术的转录组学研究 | 第26-29页 |
| 1.7 本论文的意义与研究内容 | 第29-31页 |
| 第2章 A.oryzae 112822尼古丁去甲基酶的分离纯化与肽谱分析 | 第31-48页 |
| 2.1 材料与方法 | 第31-37页 |
| 2.1.1 试剂和仪器 | 第31-32页 |
| 2.1.2 培养基和米曲霉A.oryzae 112822培养条件 | 第32页 |
| 2.1.3 米曲霉A.oryzae 112822休止细胞降解尼古丁的反应 | 第32页 |
| 2.1.4 薄层层析(TLC) | 第32页 |
| 2.1.5 高效液相色谱法(HPLC) | 第32-33页 |
| 2.1.6 粗酶液制备与微粒体提取 | 第33页 |
| 2.1.7 蛋白含量测定 | 第33页 |
| 2.1.8 蛋白质电泳 | 第33-34页 |
| 2.1.9 尼古丁去甲基酶活性测定 | 第34页 |
| 2.1.10 从A.oryzae 112822可溶性蛋白中分离纯化尼古丁去甲基酶 | 第34-35页 |
| 2.1.11 从A.oryzae 112822膜沉淀中分离纯化尼古丁去甲基酶 | 第35-36页 |
| 2.1.12 蛋白质肽谱鉴定 | 第36-37页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第37-46页 |
| 2.2.1 休止细胞降解尼古丁的检测 | 第37-39页 |
| 2.2.2 粗酶液、可溶性蛋白与微粒体的酶活测定 | 第39-41页 |
| 2.2.3 可溶性蛋白中尼古丁去甲基酶的纯化结果 | 第41-42页 |
| 2.2.4 膜沉淀中尼古丁去甲基酶的纯化结果 | 第42-44页 |
| 2.2.5 蛋白质肽谱分析结果 | 第44-45页 |
| 2.2.6 讨论 | 第45-46页 |
| 2.3 本章小结 | 第46-48页 |
| 第3章 米曲霉A.oryzae 112822尼古丁诱导与非诱导条件下转录组基因差异表达分析 | 第48-65页 |
| 3.1 材料与方法 | 第48-56页 |
| 3.1.1 菌株和培养基 | 第48页 |
| 3.1.2 试剂和仪器 | 第48-49页 |
| 3.1.3 尼古丁诱导条件的摸索 | 第49页 |
| 3.1.4 RNA提取与纯化 | 第49-52页 |
| 3.1.5 RNA-Seq文库测序 | 第52-53页 |
| 3.1.6 RNA-Seq测序数据匹配到米曲霉基因组及基因上 | 第53-54页 |
| 3.1.7基因表达水平的确定及标准化 | 第54-55页 |
| 3.1.8 基于R语言软件包DEGseq的差异表达基因分析方法 | 第55-56页 |
| 3.1.9 差异表达基因的GO功能富集分析 | 第56页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第56-65页 |
| 3.2.1 米曲霉RNA提取菌体生长时间的确定 | 第56-58页 |
| 3.2.2 米曲霉RNA样品制备 | 第58-59页 |
| 3.2.3 米曲霉RNA样品质量分析(NanoDrop 1000分光光度计) | 第59页 |
| 3.2.4 米曲霉RNA样品质量分析(Agilent Technologies 2100 Bioanalyzer) | 第59-60页 |
| 3.2.5 RNA-Seq文库制备及测序 | 第60页 |
| 3.2.6 RNA-Seq reads在米曲霉基因组及基因上的匹配统计 | 第60-62页 |
| 3.2.7 RNA-Seq技术的准确性分析 | 第62页 |
| 3.2.8 米曲霉尼古丁诱导和非诱导培养条件下基因差异表达分析 | 第62-63页 |
| 3.2.9 细胞色素P450蛋白的基因差异表达分析 | 第63-64页 |
| 3.2.10 讨论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第69页 |
