| 英文缩略词表 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 综述 | 第12-18页 |
| 1.口蹄疫及其受体研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1 口蹄疫病毒概述 | 第12页 |
| 1.2 口蹄疫的流行及危害 | 第12页 |
| 1.3 口蹄疫的防控 | 第12-13页 |
| 1.4 口蹄疫病毒受体研究进展 | 第13页 |
| 2.锌指核酸酶技术概述 | 第13-18页 |
| 2.1 锌指核酸酶结构 | 第13-14页 |
| 2.2 锌指核酸酶的构建和筛选 | 第14页 |
| 2.3 锌指核酸酶介导的靶向修饰 | 第14-16页 |
| 2.4 结语及展望 | 第16-18页 |
| 第一部分 原代奶牛成纤维细胞系的建立 | 第18-22页 |
| 1.材料 | 第18-19页 |
| 1.1 实验材料 | 第18页 |
| 1.2 实验主要仪器设备 | 第18页 |
| 1.3 实验主要试剂耗材 | 第18-19页 |
| 1.4 实验主要试剂的制备 | 第19页 |
| 2.实验方法及步骤 | 第19-21页 |
| 2.1 原代细胞培养 | 第19-20页 |
| 2.2 细胞传代培养 | 第20页 |
| 2.3 细胞冻存 | 第20页 |
| 2.4 细胞复苏 | 第20-21页 |
| 2.5 细胞生长曲线测定 | 第21页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第21页 |
| 3.1 原代细胞培养及冻存 | 第21页 |
| 3.2 细胞复苏及生长曲线测定 | 第21页 |
| 4. 讨论 | 第21-22页 |
| 第二部分 ZFN 介导的 integrin β6 基因的定点敲除 | 第22-32页 |
| 1. 材料 | 第22-24页 |
| 1.1 实验材料 | 第22页 |
| 1.2 实验主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 1.3 实验主要试剂耗材 | 第23-24页 |
| 1.4 实验主要试剂的制备 | 第24页 |
| 2. 实验方法及步骤 | 第24-29页 |
| 2.1 原代奶牛胎儿成纤维细胞培养 | 第24-25页 |
| 2.2 ZFNs 质粒的定制、转化、提取及纯化 | 第25-26页 |
| 2.3 原代奶牛成纤维细胞电转染程序的优化 | 第26-27页 |
| 2.4 ZFNs（ZFN1、ZFN2）质粒的电转染 | 第27页 |
| 2.5 ZFNs 打靶效率的检测 | 第27-28页 |
| 2.6 阳性克隆细胞的获得 | 第28-29页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第29-31页 |
| 3.1 ZFNs 质粒的获得 | 第29-30页 |
| 3.2 原代奶牛胎儿成纤维细胞电转染程序的优化 | 第30页 |
| 3.3 ZFNs 打靶效率的检测 | 第30-31页 |
| 3.4 阳性克隆细胞的获得 | 第31页 |
| 4. 讨论 | 第31-32页 |
| 第三部分 ZFN 介导的 integrin β6 基因的同源重组 | 第32-44页 |
| 1. 材料 | 第32-33页 |
| 1.1 实验材料 | 第32页 |
| 1.2 实验主要仪器设备 | 第32页 |
| 1.3 实验主要试剂耗材 | 第32-33页 |
| 1.4 实验主要溶液的制备 | 第33页 |
| 2. 实验方法及步骤 | 第33-39页 |
| 2.1 引物设计 | 第33页 |
| 2.2 目的基因的获得 | 第33-36页 |
| 2.3 构建同源打靶载体 pβ6LGNR | 第36-37页 |
| 2.4 原代奶牛上皮及成纤维细胞培养 | 第37页 |
| 2.5 原代奶牛小肠上皮细胞电转染程序的优化 | 第37页 |
| 2.6 pβ6LGNR 质粒的提取及线性化 | 第37页 |
| 2.7 ZFN 介导的同源打靶效率测定及阳性克隆细胞的获得 | 第37-39页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第39-43页 |
| 3.1 左右同源臂（L、R）及无启动子 GFPORF 目的基因的获得 | 第39-40页 |
| 3.2 获得串联的 L 和 GFPORF | 第40页 |
| 3.3 pβ6LGNR 重组质粒的构建 | 第40-41页 |
| 3.4 原代奶牛小肠上皮细胞电转染程序的优化 | 第41页 |
| 3.5 原代奶牛小肠上皮细胞中 ZFN 介导的同源重组 | 第41页 |
| 3.6 ZFN 介导的同源重组效率的检测及阳性克隆细胞的获得 | 第41-43页 |
| 4. 讨论 | 第43-44页 |
| 第四部分 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第49-50页 |
