中文摘要 | 第4-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
中英文缩略语表 | 第10-17页 |
第1章 前言 | 第17-27页 |
1.1 油菜素内酯生物途径及其生理作用 | 第17-22页 |
1.1.1 油菜素内酯信号转导途径 | 第17-19页 |
1.1.2 油菜素内酯合成途径 | 第19页 |
1.1.3 油菜素内酯的生理作用 | 第19-22页 |
1.2 植物开花的分子机制研究进展 | 第22-24页 |
1.2.1 四大开花途径 | 第22-23页 |
1.2.2 光周期途径分子机制 | 第23-24页 |
1.3 油菜素内酯相关基因与开花调控 | 第24-25页 |
1.3.1 BRI1 基因的研究进展及其与开花时间的关系 | 第24-25页 |
1.3.2 CPD 基因的研究进展及其与开花时间的关系 | 第25页 |
1.4 本研究的目的和意义 | 第25-27页 |
第2章 GmBRI1 基因和 4 个 GmCPD 同源基因的克隆及生物信息学分析 | 第27-45页 |
2.1 材料 | 第27-28页 |
2.1.1 植物材料 | 第27页 |
2.1.2 菌株 | 第27页 |
2.1.3 酶及试剂 | 第27页 |
2.1.4 引物 | 第27-28页 |
2.1.5 主要仪器设备 | 第28页 |
2.2 方法 | 第28-32页 |
2.2.1 DNA 提取 | 第28-29页 |
2.2.2 Trizol 法提取植物总 RNA | 第29页 |
2.2.3 cDNA 的合成 | 第29-30页 |
2.2.4 GmBRI1/ GmCPD 基因的 PCR 扩增 | 第30页 |
2.2.5 PCR 产物回收 | 第30-31页 |
2.2.6 回收产物连接 T 载体 | 第31页 |
2.2.7 冻融法转化大肠杆菌 DH5α感受态细胞 | 第31-32页 |
2.2.8 生物信息学分析 | 第32页 |
2.3 结果 | 第32-42页 |
2.3.1 GmBRI1 基因的克隆 | 第32-33页 |
2.3.2 GmBRI1 基因的生物信息学分析 | 第33-37页 |
2.3.3 GmCPD 基因的克隆 | 第37-38页 |
2.3.4 GmCPD 基因的生物信息学分析 | 第38-42页 |
2.4 讨论 | 第42-43页 |
2.5 小结 | 第43-45页 |
第3章 GmBRI1 和 4 个 GmCPD 同源基因在大豆中的表达模式分析 | 第45-54页 |
3.1 材料 | 第45-46页 |
3.1.1 植物材料 | 第45页 |
3.1.2 试剂 | 第45页 |
3.1.3 引物 | 第45-46页 |
3.1.4 主要仪器设备 | 第46页 |
3.2 方法 | 第46-47页 |
3.2.1 材料种植与取样 | 第46页 |
3.2.2 Trizol 法提取植物总 RNA | 第46页 |
3.2.3 cDNA 的合成 | 第46页 |
3.2.4 荧光实时定量 PCR | 第46-47页 |
3.3 结果 | 第47-51页 |
3.3.1 在大豆不同组织中的表达 | 第47-49页 |
3.3.2 外源 BR 处理下基因的表达 | 第49-51页 |
3.4 讨论 | 第51-53页 |
3.5 小结 | 第53-54页 |
第4章 GmBRI1 和 4 个 GmCPD 同源基因的功能分析 | 第54-96页 |
4.1 材料 | 第54-55页 |
4.1.1 植物材料 | 第54页 |
4.1.2 菌株 | 第54页 |
4.1.3 酶及试剂 | 第54页 |
4.1.4 引物及序列 | 第54-55页 |
4.1.5 主要仪器设备 | 第55页 |
4.2 方法 | 第55-60页 |
4.2.1 质粒的提取 | 第55-56页 |
4.2.2 Xbal I 和 Kpn I / Sac I 双酶切 | 第56页 |
4.2.3 酶切产物回收 | 第56-57页 |
4.2.4 用 T4 连接酶连接目的基因与载体 | 第57页 |
4.2.5 GV3101 根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第57页 |
4.2.6 电击法转化 GV3101 感受态细胞 | 第57-58页 |
4.2.7 蘸花法转化拟南芥 | 第58-59页 |
4.2.8 Trizol 法提取植物总 RNA | 第59页 |
4.2.9 cDNA 的合成 | 第59页 |
4.2.10 PCR 反应验证基因表达 | 第59-60页 |
4.2.11 拟南芥的处理及培养 | 第60页 |
4.2.12 数据的测量与分析 | 第60页 |
4.3 结果 | 第60-92页 |
4.3.1 转基因拟南芥的获得与鉴定 | 第60-67页 |
4.3.2 GmBRI1 基因的表达恢复了拟南芥突变体 bri1-5 的表型 | 第67-72页 |
4.3.3 GmBRI1 基因在 bri1-5 中的表达修复了 BR 信号通路 | 第72-77页 |
4.3.4 GmCPD 基因的表达恢复了拟南芥突变体 cpd-91 的表型 | 第77-86页 |
4.3.5 GmCPD 基因在 cpd-91 中的表达修复了 BR 合成途径 | 第86-92页 |
4.4 讨论 | 第92-94页 |
4.5 小结 | 第94-96页 |
第5章 GmBRI1 和 4 个 GmCPD 同源基因与开花的关系 | 第96-113页 |
5.1 材料 | 第96-97页 |
5.1.1 植物材料 | 第96页 |
5.1.2 试剂 | 第96页 |
5.1.3 引物 | 第96-97页 |
5.1.4 主要仪器设备 | 第97页 |
5.2 方法 | 第97页 |
5.2.1 Trizol 法提取植物总 RNA | 第97页 |
5.2.2 cDNA 的合成 | 第97页 |
5.2.3 荧光实时定量 PCR | 第97页 |
5.3 结果 | 第97-109页 |
5.3.1 对拟南芥开花的影响 | 第97-100页 |
5.3.2 在大豆开花逆转系统中的表达 | 第100-104页 |
5.3.3 在不同光周期敏感性大豆品种中的表达 | 第104-109页 |
5.4 讨论 | 第109-110页 |
5.5 小结 | 第110-113页 |
第6章 GmBRI1 和 4 个 GmCPD 同源基因在 GmFT2a 转基因大豆中的表达分析 | 第113-135页 |
6.1 材料 | 第113-115页 |
6.1.1 植物材料 | 第113页 |
6.1.2 菌种 | 第113页 |
6.1.3 试剂 | 第113页 |
6.1.4 引物 | 第113-114页 |
6.1.5 主要仪器设备 | 第114-115页 |
6.2 方法 | 第115-117页 |
6.2.1 质粒的提取 | 第115页 |
6.2.2 PCR 反应 | 第115页 |
6.2.3 Xbal I 和 Sac I 双酶切 | 第115页 |
6.2.4 用 T4 连接酶连接目的基因与载体 | 第115-116页 |
6.2.5 EHA101 根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第116页 |
6.2.6 电击法转化 EHA101 感受态细胞 | 第116页 |
6.2.7 根癌农杆菌介导的的大豆子叶节转化法 | 第116-117页 |
6.2.8 Trizol 法提取植物总 RNA | 第117页 |
6.2.9 cDNA 的合成 | 第117页 |
6.2.10 荧光实时定量 PCR | 第117页 |
6.3 结果 | 第117-133页 |
6.3.1 GmFT2a 转基因大豆植株的获得 | 第117-128页 |
6.3.2 GmBRI1 和 4 个 GmCPD 同源基因在转基因植株中的表达 | 第128-133页 |
6.4 讨论 | 第133-134页 |
6.5 小结 | 第134-135页 |
结论 | 第135-137页 |
参考文献 | 第137-149页 |
附录 | 第149-152页 |
作者简介及科研成果 | 第152页 |
攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第152-153页 |
致谢 | 第153-154页 |