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中国特有小型猪内源反转录病毒宿主范围及细胞嗜性研究

缩略词表(Abbreviation)第1-8页
中文摘要第8-11页
英文摘要第11-15页
前言第15-21页
材料与方法第21-38页
 1. 材料第21-23页
 2.P ERV- WZSP- env基因的扩增与克隆第23-30页
   ·PERV-WZSP-env序列分析第23-24页
   ·PERV-WZSP-env基因引物设计与合成第24-25页
   ·外周血单个核细胞的分离第25页
   ·PBMC 总RNA的提取第25页
   ·反转录合成cDNA第一链第25-26页
   ·PCR扩增产物的克隆与鉴定第26-29页
   ·pHCMV-env重组表达质粒的构建及鉴定第29-30页
 3. 重组反转录病毒载体的构建第30-31页
   ·MSCVneo-GFP的构建策略第30页
   ·GFP基因引物设计与合成第30-31页
   ·PCR扩增GFP片段第31页
   ·目的片段的纯化、回收第31页
   ·反转录病毒载体MSCVneo双酶切及GFP连接第31页
   ·反转录病毒载体的鉴定第31页
 4. 整合PERV囊膜的假型鼠白血病病毒的包装第31-35页
   ·HEK293T细胞培养第31-32页
   ·菌液扩大培养第32页
   ·质粒DNA的中量提取及纯化第32-34页
   ·假型反转录病毒的包装第34-35页
   ·转染细胞基因组中env基因整合及转录情况的检测第35页
   ·病毒浓缩第35页
   ·假型病毒感染性的检测第35页
   ·流式细胞仪测定假型反转录病毒的滴度第35页
 5.P ERV细胞感染谱分析第35-38页
   ·细胞培养第35-36页
   ·细胞感染实验第36-37页
   ·细胞感染谱分析第37-38页
结果第38-53页
 1. 五指山猪PERV-env核酸序列比对与进化分析结果第38-40页
   ·五指山猪PERV-env核酸序列比对结果第38-39页
   ·五指山猪PERV-Env氨基酸序列进化分析结果第39-40页
 2.P ERV-env基因扩增、克隆及鉴定结果第40-44页
   ·PERV-env基因的PCR扩增结果第40页
   ·pGEM-T-env重组质粒的鉴定结果与初步分析第40-43页
   ·pHCMV-env表达质粒的鉴定结果第43-44页
 3.p MSCVneo-GFP的构建与鉴定结果第44-45页
   ·GFP基因PCR扩增结果第44页
   ·重组反转录病毒载体pMSCVneo-GFP的构建及鉴定第44-45页
 4. 假型反转录病毒包装结果第45-49页
   ·包装质粒转染HEK293T细胞结果第45-47页
   ·转染细胞中env基因的整合及转录情况的检测结果第47-48页
   ·假型病毒粒子的浓缩及鉴定第48页
   ·假型病毒粒子感染性的检测第48-49页
   ·假型反转录病毒滴度测定结果第49页
 5. 细胞感染谱的获得及分析第49-53页
   ·假型反转录病毒感染多种细胞结果第49-51页
   ·PERV-WZSP感染谱分析第51-53页
讨论第53-63页
 1. 关于PERV的体外宿主范围细胞嗜性第53-56页
 2. 关于PERV-WZSP-A囊膜化的假型鼠干细胞病毒包装第56-59页
 3. 关于PERV-WZSP-A细胞感染谱第59-61页
 4.P ERV-Env关键区域的比对结果第61-63页
结论第63-64页
参考文献第64-71页
文献综述第71-85页
 参考文献第79-85页
附录第85-86页
个人简历第86-87页
致谢第87页

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