| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 1 引言 | 第11-22页 |
| ·口蹄疫研究进展 | 第11-15页 |
| ·口蹄疫的分布流行及其危害 | 第11页 |
| ·FMDV 的免疫应答机制研究进展 | 第11-12页 |
| ·口蹄疫疫苗研究进展 | 第12页 |
| ·口蹄疫病毒的基因组结构及其功能 | 第12-14页 |
| ·口蹄疫病毒的抗原性与变异性 | 第14-15页 |
| ·口蹄疫病毒VP4 基因的重要性 | 第15页 |
| ·FMDV 感染的发病机制 | 第15页 |
| ·大肠杆菌表达系统及PET 表达载体简介 | 第15-16页 |
| ·树突状细胞研究现状 | 第16-17页 |
| ·DCs 的起源和分类 | 第16-17页 |
| ·DCs 的生物学功能 | 第17页 |
| ·DCS 对抗原提呈途径 | 第17-19页 |
| ·MHC-Ⅰ类分子介导的抗原提呈途径 | 第17-18页 |
| ·MHC-Ⅱ类分子介导的抗原提呈途径 | 第18页 |
| ·非经典的CD1 途径 | 第18-19页 |
| ·DCS 与口蹄疫病毒的相互关系 | 第19-20页 |
| ·T 细胞介导的细胞免疫 | 第20-21页 |
| ·细胞因子IFN-г和IL-4 的生物学特性 | 第21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 2 试验一：口蹄疫病毒VP4 基因的克隆和原核表达 | 第22-41页 |
| ·试验材料、仪器及试剂 | 第22-27页 |
| ·菌株、载体和细胞 | 第22-23页 |
| ·试验材料 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| ·培养基及溶液的配制 | 第25-27页 |
| ·试验方法 | 第27-35页 |
| ·重组质粒pET-32a-VP4 的小量制备 | 第27-29页 |
| ·原核表达载体pET-32a(+)的制备 | 第29-30页 |
| ·VP4 与pET-32a(+)定向连接 | 第30页 |
| ·连接产物转化宿主菌 | 第30-31页 |
| ·重组质粒pET-32a-VP4 的鉴定 | 第31页 |
| ·重组质粒pET-32a-VP4 的DNA 序列测定与分析 | 第31-32页 |
| ·重组质粒pET-32a-VP4 和空载体pET-32a(+)转化表达感受态细胞BL21 | 第32页 |
| ·重组质粒pET-32a-VP4 的鉴定 | 第32页 |
| ·重组菌和空载体的诱导表达 | 第32页 |
| ·表达产物的提取 | 第32-33页 |
| ·SDS- PAGE 凝胶的制备 | 第33页 |
| ·表达产物蛋白的SDS- PAGE 电泳 | 第33-34页 |
| ·电洗脱 | 第34页 |
| ·蛋白质浓度的测定及保存 | 第34-35页 |
| ·表达产物的Western blot 检测 | 第35页 |
| ·结果和分析 | 第35-38页 |
| ·重组质粒pBluescriptⅡSK(+)-VP4 与表达载体pET-32a 的双酶切结果 | 第35-36页 |
| ·重组质粒pBluescriptⅡSK(+)-VP4 的序列测定与分析 | 第36页 |
| ·重组质粒pET-32a-VP4 的构建 | 第36-37页 |
| ·重组质粒测序鉴定结果 | 第37页 |
| ·表达产物的检测及最佳表达条件的确定 | 第37-38页 |
| ·表达产物的 WESTERN BLOT 分析 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 3 试验二：负载口蹄疫病毒VP4 蛋白质抗原的树突状细胞启动的T 细胞应答 | 第41-52页 |
| ·试验材料、仪器及试剂 | 第41-43页 |
| ·试验材料 | 第41页 |
| ·主要仪器设备 | 第41页 |
| ·主要试剂配置 | 第41-43页 |
| ·试验动物 | 第43页 |
| ·试验方法 | 第43-46页 |
| ·小鼠颈浅淋巴结内T 细胞的制备 | 第43页 |
| ·DC 细胞的制备 | 第43-44页 |
| ·负载口蹄疫病毒VP4 蛋白树突状细胞与T 细胞共培养 | 第44页 |
| ·ELISA 测定共培养物中 IFN-γ的含量: | 第44-45页 |
| ·ELISA 测定共培养物中 IL-4 的含量 | 第45-46页 |
| ·统计处理 | 第46页 |
| ·结果和分析 | 第46-50页 |
| ·DCs 体外培养的生长情况 | 第46-47页 |
| ·ELISA 检测体外共培养体系中表达IFN-γ和IL-4 的水平 | 第47-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 4 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第60-61页 |
| 作者简历 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
