| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-22页 |
| 1.1 PPARγ | 第10-14页 |
| 1.1.1 PPARγ概述 | 第10-11页 |
| 1.1.2 PPARγ及其配体与肿瘤 | 第11-13页 |
| 1.1.3 PPARγ作为泛素化连接酶的生物学功能 | 第13-14页 |
| 1.2 EGFR | 第14-17页 |
| 1.2.1 EGFR概述 | 第14页 |
| 1.2.2 细胞核内EGFR | 第14-15页 |
| 1.2.3 细胞核内EGFR与肿瘤治疗 | 第15-17页 |
| 1.3 MDM2(murine double minute2) | 第17-18页 |
| 1.3.1 MDM2概述 | 第17页 |
| 1.3.2 MDM2的生理功能 | 第17-18页 |
| 1.4 本研究的意义 | 第18页 |
| 1.5 主要研究内容和技术路线 | 第18-22页 |
| 1.5.1 主要研究内容 | 第18-21页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 EGFR诱导PPARγ-Y74磷酸化 | 第22-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第22页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第22页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 实验仪器和设备 | 第23-24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-37页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第24-25页 |
| 2.2.2 细胞总蛋白样品的制备 | 第25页 |
| 2.2.3 细胞总蛋白浓度测定 | 第25页 |
| 2.2.4 细胞质和细胞核的分离 | 第25-26页 |
| 2.2.5 Western Blot检测 | 第26-27页 |
| 2.2.6 抗体制备 | 第27-29页 |
| 2.2.7 PPARγ原核表达载体的构建 | 第29-33页 |
| 2.2.8 PPARγ-Y74A原核表达载体的构建：点突变 | 第33-35页 |
| 2.2.9 GST-PPARγ和GST-PPARγ-Y74A蛋白的表达与纯化 | 第35-36页 |
| 2.2.10 磷酸化位点预测 | 第36页 |
| 2.2.11 体外磷酸化 | 第36-37页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第37-40页 |
| 2.3.1 细胞核EGFR与PPARγ的相互关系 | 第37页 |
| 2.3.2 软件预测PPARγ可能的磷酸化位点 | 第37-38页 |
| 2.3.3 体外磷酸化验证PPARγ磷酸化位点 | 第38页 |
| 2.3.4 EGFR调节PPARγ-Y74磷酸化 | 第38-40页 |
| 2.4 本章小结 | 第40-41页 |
| 第三章 PPARγ-Y74A突变体抑制EGFR/MDM2信号介导的PPARγ 降解 | 第41-49页 |
| 3.1 实验材料 | 第41页 |
| 3.1.1 实验细胞系 | 第41页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第41页 |
| 3.1.3 实验仪器与设备 | 第41页 |
| 3.2.实验方法 | 第41-43页 |
| 3.2.1 细胞转染（以96孔板为例） | 第41页 |
| 3.2.2 免疫共沉淀Co-IP | 第41-42页 |
| 3.2.3 细胞内PPARγ泛素化检测 | 第42-43页 |
| 3.3 实验结果 | 第43-48页 |
| 3.3.1 MDM2与PPARγ在细胞内的相互关系 | 第43-45页 |
| 3.3.2 PPARγ- Y74A突变体抑制了MDM2和PPARγ的绑定关系 | 第45-46页 |
| 3.3.3 PPARγ-Y74A抑制了EGFR/MDM2信号介导的泛素化过程 | 第46-47页 |
| 3.3.4 PPARγ-Y74A抑制了EGFR/MDM2信号介导的PPARγ的降解 | 第47-48页 |
| 3.4 本章小结 | 第48-49页 |
| 第四章 PPARγ-Y74A突变体抑制EGFR/NFκB信号激活 | 第49-57页 |
| 4.1 实验材料 | 第49页 |
| 4.1.1 实验细胞系 | 第49页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第49页 |
| 4.1.3 实验仪器与设备 | 第49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-52页 |
| 4.2.1 mRNA的提取 | 第49-50页 |
| 4.2.2 反转录PCR | 第50页 |
| 4.2.3 荧光定量PCR | 第50-52页 |
| 4.3 实验结果 | 第52-56页 |
| 4.3.1 PPARγ与EGFR/NFκB信号的关系 | 第52-54页 |
| 4.3.2 PPARγ-Y74A与EGFR/NFκB信号的关系 | 第54-55页 |
| 4.3.3 PPARγ-Y74A与EGFR/NFκB介导基因表达 | 第55-56页 |
| 4.4 本章小结 | 第56-57页 |
| 第五章 PPARγ-Y74A突变体抑制肿瘤细胞增生、增强化疗药物敏感性 | 第57-66页 |
| 5.1 实验材料 | 第57页 |
| 5.1.1 实验细胞 | 第57页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第57页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第57页 |
| 5.2 实验方法 | 第57-61页 |
| 5.2.1 稳定表达细胞系的构建 | 第57-58页 |
| 5.2.2 细胞计数 | 第58页 |
| 5.2.3 软琼脂克隆集落形成实验soft agar colony formation assay | 第58页 |
| 5.2.4 MTT实验 | 第58-59页 |
| 5.2.5 Annexin V/PI双染色法测细胞凋亡 | 第59页 |
| 5.2.6 免疫组化 | 第59-61页 |
| 5.3 实验结果 | 第61-65页 |
| 5.3.1 PPARγ-Y74A抑制了c-Myc等抗凋亡蛋白基因表达 | 第61-62页 |
| 5.3.2 PPARγ-Y74A抑制了肿瘤细胞的增殖 | 第62-63页 |
| 5.3.3 PPARγ-Y74A增加了细胞对化疗药物的敏感性 | 第63-64页 |
| 5.3.4 PPARγ-Y74A增加化疗药物诱导的细胞凋亡 | 第64-65页 |
| 5.3.5 PPARγ和p-PPARγ-Y74在肿瘤组织中的表达 | 第65页 |
| 5.4 本章小结 | 第65-66页 |
| 第六章 总结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 在学期间的学术成果 | 第76-77页 |
| 参加课题 | 第77页 |
