| 摘要 | 第3-4页 |
| Summary | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第10-21页 |
| 1.1 口蹄疫概述 | 第10-11页 |
| 1.1.1 口蹄疫病毒的研究现状 | 第10-11页 |
| 1.1.2 口蹄疫病毒基因组的结构及功能 | 第11页 |
| 1.2 口蹄疫疫苗的研究进展 | 第11-15页 |
| 1.2.1 传统疫苗 | 第12页 |
| 1.2.2 核酸疫苗 | 第12页 |
| 1.2.3 合成肽疫苗 | 第12-13页 |
| 1.2.4 亚单位疫苗 | 第13页 |
| 1.2.5 活载体疫苗 | 第13-14页 |
| 1.2.6 新型减毒疫苗 | 第14-15页 |
| 1.3 减毒沙门菌与黏膜免疫 | 第15-19页 |
| 1.3.1 黏膜免疫概述 | 第15-16页 |
| 1.3.2 沙门菌的生物学特性及其减毒类型 | 第16-17页 |
| 1.3.3 沙门菌侵染机制 | 第17-18页 |
| 1.3.3.1 沙门菌相关毒力岛及液泡的生物合成 | 第18页 |
| 1.3.3.2 沙门菌与宿主产生的应答反应与存活策略 | 第18页 |
| 1.3.3.3 上皮细胞途径与非上皮细胞途径 | 第18页 |
| 1.3.4 减毒沙门菌作为活载体疫苗的优势 | 第18-19页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第19页 |
| 1.5 研究内容及方法 | 第19-21页 |
| 1.5.1 A型FMDV VP1基因扩增及优化合成及在减毒沙门菌中的表达 | 第19页 |
| 1.5.2 重组减毒沙门菌X4550（pYA3341-VP1）黏膜免疫效果分析 | 第19-20页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 重组A型FMDV VP1基因减毒沙门菌表达质粒的构建及表达 | 第21-35页 |
| 2.1 材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 毒株、菌株及质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂及工具酶 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要仪器及设备 | 第22页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第22-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-29页 |
| 2.2.1 PCR引物设计与合成 | 第23页 |
| 2.2.2 目的基因VP1的优化合成 | 第23页 |
| 2.2.3 pUC57-simple-VP1质粒提取 | 第23-24页 |
| 2.2.4 pYA3341质粒提取 | 第24页 |
| 2.2.5 目的基因VP1与表达载体pYA3341双酶切片段的回收 | 第24-25页 |
| 2.2.6 目的片段VP1与质粒pYA3341的连接 | 第25页 |
| 2.2.7 重组质粒的转化 | 第25-26页 |
| 2.2.7.1 感受态细胞X6212的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.7.2 重组质粒转化X6212 | 第26页 |
| 2.2.8 阳性质粒pYA3341-VP1的提取及鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.9 在中间宿主x3730和终末宿主x4550中的转化 | 第27-28页 |
| 2.2.9.1 感受态细胞X3730和X4550的制备 | 第27页 |
| 2.2.9.2 pYA3341-VP1依次电转化X3730和X4550 | 第27-28页 |
| 2.2.10 重组菌X4550（pYA3341-VP1）生长曲线测定 | 第28页 |
| 2.2.11 重组pYA3341-VP1在X4550中的表达及鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.11.1 重组pYA3341-VP1在X4550中的诱导表达 | 第28页 |
| 2.2.11.2 重组菌X4550（pYA3341-VP1） 的SDS-PAGE分析 | 第28-29页 |
| 2.2.11.3 重组菌X4550（pYA3341-VP1） Western-blot分析 | 第29页 |
| 2.3 结果与分析 | 第29-33页 |
| 2.3.1 PCR扩增目的片段VP1 | 第29页 |
| 2.3.2 目的基因VP1序列的分析及优化 | 第29-30页 |
| 2.3.3 重组表达质粒pYA3341-VP1在X6212中的鉴定 | 第30页 |
| 2.3.4 重组表达质粒pYA3341-VP1在X3730和X4550中的鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.5 重组菌生长状况分析 | 第31页 |
| 2.3.6 重组减毒沙门菌X4550（pYA3341-VP1）表达外源蛋白分析 | 第31-32页 |
| 2.3.7 重组减毒沙门菌X4440（pYA3341-VP1）Western-blot鉴定结果 | 第32-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 重组沙门菌X4550（pYA3341-VP1）对小鼠黏膜免疫试验 | 第35-42页 |
| 3.1 材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第35页 |
| 3.1.2 主要设备及试验仪器 | 第35页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第35页 |
| 3.1.4 菌株及质粒 | 第35页 |
| 3.1.5 试剂配制 | 第35-36页 |
| 3.2 动物免疫试验 | 第36-38页 |
| 3.2.1 重组减毒沙门菌X4550（pYA3341-VP1）与减毒沙门菌X4550（pYA3341）的制备 | 第36页 |
| 3.2.2 试验小鼠分组 | 第36页 |
| 3.2.3 小鼠黏膜样品的收集及处理 | 第36-37页 |
| 3.2.4 免疫小鼠的血清收集 | 第37页 |
| 3.2.5 小鼠黏膜样品sIgA的检测 | 第37页 |
| 3.2.6 小鼠血清中IgA、IgG的检测 | 第37-38页 |
| 3.2.7 小鼠中和抗体测定 | 第38页 |
| 3.3 结果 | 第38-40页 |
| 3.3.1 免疫小鼠黏膜样品sIgA的检测结果 | 第38-39页 |
| 3.3.2 免疫小鼠血液中IgG、IgA的检测结果 | 第39-40页 |
| 3.3.3 小鼠中和抗体测定结果分 | 第40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-42页 |
| 全文结论 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 附录 | 第50-51页 |
| 作者简历 | 第51-52页 |
| 导师简介 | 第52-53页 |
