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植物顶端组织高效诱导型启动子的创建与表达调控研究

中文摘要第9-15页
第一章 前言第15-63页
    第一节 启动子的一般特点第15-18页
    第二节 组成型启动子第18-24页
        1.2.1 CaMV 35S启动子第20-21页
        1.2.2 植物启动子第21-23页
        1.2.3 Ocs和Nos启动子第23-24页
        1.2.4 双向启动子第24页
    第三节 组织特异性启动子第24-39页
        1.3.1 绿色组织特异性启动子第28-30页
        1.3.2 花粉组织特异性启动子第30-31页
        1.3.3 胚乳组织特异性启动子第31-33页
        1.3.4 胚乳和花粉特异性启动子第33页
        1.3.5 胚特异性启动子第33-34页
        1.3.6 种子特异性启动子第34-35页
        1.3.7 分生组织特异性启动子第35-36页
        1.3.8 韧皮部组织特异性启动子第36-38页
        1.3.9 多组织特异性启动子第38-39页
    第四节 诱导型启动子第39-51页
        1.4.1 光诱导型启动子第39-42页
        1.4.2 损伤诱导启动子第42-43页
        1.4.3 化学物质诱导启动子第43-45页
        1.4.5 水杨酸诱导启动子第45-48页
        1.4.6 温度诱导启动子第48-50页
        1.4.7 胁迫条件诱导启动子第50-51页
    第五节 特异性启动子的应用第51-57页
        1.5.1 抗虫性方面的应用第51-53页
        1.5.2 植物分化发育研究方面的应用第53页
        1.5.3 抗病毒方面的应用第53-54页
        1.5.4 创建雄性不育系和恢复系方面的应用第54页
        1.5.5 花卉改良的应用第54-55页
        1.5.6 改善作物品质和生物制药(生物反应器)的应用第55-56页
        1.5.7 在抗除草剂方面的应用第56-57页
        1.5.8 防止水果腐烂、改善水果品质的应用第57页
    第六节 绿色荧光蛋白第57-60页
        1.6.1 绿色荧光蛋白的结构特点第57-58页
        1.6.2 绿色荧光蛋白的种类第58-59页
        1.6.3 绿色荧光蛋白作为标记分子的优点第59-60页
        1.6.4 绿色荧光蛋白的应用第60页
    第七节 本研究的目的意义第60-63页
第二章 材料与方法第63-83页
    第一节 实验材料第63-68页
        2.1.1 本工作所用菌株第63页
        2.1.2 与本文有关的质粒第63-64页
        2.1.3 所用试剂第64-65页
        2.1.4 人工合成的寡核苷酸片段第65-66页
        2.1.5 培养基第66-67页
        2.1.6 植物受体第67页
        2.1.7 水杨酸第67-68页
    第二节 实验方法第68-83页
        2.2.1 质粒DNA的小量提取第68-69页
            2.2.1.1 所涉及溶液的配制第68页
            2.2.1.2 质粒DNA的提取方法第68-69页
        2.2.2 质粒DNA的大量制备第69-70页
        2.2.3 合成序列的退火与加磷第70页
        2.2.4 九种启动子的构建路线第70-73页
        2.2.5 DNA的限制性酶切反应第73页
        2.2.6 目的片段的电泳回收第73-74页
        2.2.7 载体与DNA的连接反应第74页
        2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备第74-75页
        2.2.9 质粒DNA转化大肠杆菌第75页
        2.2.10 转化子的快速筛选第75-76页
        2.2.11 农杆菌LBA4404的转化第76-77页
            2.2.11.1 LBA4404感受态细胞的制备第76页
            2.2.11.2 重组质粒转入LBA404细胞第76页
            2.2.11.3 农杆菌质粒DNA的提取第76-77页
        2.2.12 烟草的转化第77-78页
        2.2.13 植物DNA的提取第78-79页
        2.2.14 转基因烟草的PCR检测第79页
        2.2.15 植物基因组DNA的Southern Blot第79-81页
        2.2.16 转基因烟草的水杨酸诱导第81-82页
        2.2.17 烟草蛋白的提取及GFP绿色荧光发射强度的分析第82-83页
第三章 结果与分析第83-150页
    第一节 启动子的分子设计第83页
    第二节 带有不同数目的B1元件和as-1元件的启动子载体的构建第83-103页
        3.2.1 pUC19.GFP质粒的构建第84-85页
        3.2.2 pUC35S.GFP质粒的构建第85-86页
        3.2.3 pUC2a.GFP质粒的构建第86-87页
        3.2.4 pUC4a.GFP质粒的构建第87-89页
        3.2.5 pUC1B2a.GFP质粒的构建第89-90页
        3.2.6 pUC2B2a.GFP质粒的构建第90-92页
        3.2.7 pUC4B2a.GFP质粒的构建第92-93页
        3.2.8 pUC1B4a.GFP质粒的构建第93-94页
        3.2.9 pUC2B4a.GFP质粒的构建第94-96页
        3.2.10 pUC4B4a.GFP质粒的构建第96-97页
        3.2.11 pUC1B1a.GFP质粒的构建第97-99页
        3.2.12 pUC2B1a.GFP质粒的构建第99-100页
        3.2.13 pUC4B1a.GFP质粒的构建第100-103页
    第三节 植物表达载体的构建第103-110页
        3.3.1 pBI1B1a.GFP植物表达载体的构建第103-104页
        3.3.2 pBI2B1a.GFP植物表达载体的构建第104-105页
        3.3.3 pBI4B1a.GFP植物表达载体的构建第105-106页
        3.3.4 pBI1B2a.GFP植物表达载体的构建第106页
        3.3.5 pBI2B2a.GFP植物表达载体的构建第106-107页
        3.3.6 pBI4B2a.GFP植物表达载体的构建第107-108页
        3.3.7 pBI1B4a.GFP植物表达载体的构建第108页
        3.3.8 pBI2B4a.GFP植物表达载体的构建第108-109页
        3.3.9 pBI4B4a.GFP植物表达载体的构建第109-110页
    第四节 转化农杆菌的制备及转基因烟草的获得第110-113页
        3.4.1 转化农杆菌的制备第110页
        3.4.2 各种启动子的转基因烟草植株的获得第110-113页
    第五节 各种启动子的转基因烟草植株的PCR检测第113-114页
    第六节 各种启动子的转基因烟草植株的southern blot分析第114-115页
    第七节 各种启动子在转基因烟草中的特异性表达第115-133页
        3.7.1 各种启动子的转基因烟草植株的显微镜观察第115-127页
            3.7.1.1 不同启动子在相同组织中的表达情况第117-119页
            3.7.1.2 不同启动子在不同部位的叶片中的表达情况第119-122页
            3.7.1.3 不同启动子在茎干的不同部位的表达情况第122-125页
            3.7.1.4 不同启动子在根部的表达情况第125-126页
            3.7.1.5 小结第126-127页
        3.7.2 不同启动子的转基因植株的荧光分光光度计分析第127-133页
            3.7.2.1 含有单个B1元件的不同启动子的表达情况第127-128页
            3.7.2.2 含有两个B1元件的不同启动子的表达情况第128-129页
            3.7.2.3 含有四个B1元件的不同启动子的表达情况第129-131页
            3.7.2.4 小结第131-133页
    第八节 不同启动子在水杨酸诱导后的表达水平的变化第133-150页
        3.8.1 不同启动子水杨酸诱导后的显微镜观察第133-141页
            3.8.1.1 2mM水杨酸溶液的诱导效果第133-134页
            3.8.1.2 20mM水杨酸溶液的诱导效果第134-135页
            3.8.1.3 50mM水杨酸溶液的诱导效果第135-140页
                3.8.1.3.1 水杨酸对单个B1元件启动子的诱导效果第136-137页
                3.8.1.3.2 水杨酸对两个B1元件启动子的诱导效果第137页
                3.8.1.3.3 水杨酸对四个B1元件启动子的诱导效果第137-140页
            3.8.1.4 小结第140-141页
        3.8.2 水杨酸诱导后的荧光分光光度计分析第141-148页
            3.8.2.1 水杨酸诱导单个as-1元件启动子的表达第141-143页
            3.8.2.2 水杨酸诱导两个as-1元件启动子的表达第143-145页
            3.8.2.3 水杨酸诱导四个as-1元件启动子的表达第145-146页
            3.8.2.4 水杨酸的诱导效果与启动子中as-1元件数目的关系第146-148页
        3.8.3 小结第148-150页
第四章 结论第150-152页
参考文献第152-170页
本研究发表的论文第170-171页
致谢第171页

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