中文摘要 | 第9-15页 |
第一章 前言 | 第15-63页 |
第一节 启动子的一般特点 | 第15-18页 |
第二节 组成型启动子 | 第18-24页 |
1.2.1 CaMV 35S启动子 | 第20-21页 |
1.2.2 植物启动子 | 第21-23页 |
1.2.3 Ocs和Nos启动子 | 第23-24页 |
1.2.4 双向启动子 | 第24页 |
第三节 组织特异性启动子 | 第24-39页 |
1.3.1 绿色组织特异性启动子 | 第28-30页 |
1.3.2 花粉组织特异性启动子 | 第30-31页 |
1.3.3 胚乳组织特异性启动子 | 第31-33页 |
1.3.4 胚乳和花粉特异性启动子 | 第33页 |
1.3.5 胚特异性启动子 | 第33-34页 |
1.3.6 种子特异性启动子 | 第34-35页 |
1.3.7 分生组织特异性启动子 | 第35-36页 |
1.3.8 韧皮部组织特异性启动子 | 第36-38页 |
1.3.9 多组织特异性启动子 | 第38-39页 |
第四节 诱导型启动子 | 第39-51页 |
1.4.1 光诱导型启动子 | 第39-42页 |
1.4.2 损伤诱导启动子 | 第42-43页 |
1.4.3 化学物质诱导启动子 | 第43-45页 |
1.4.5 水杨酸诱导启动子 | 第45-48页 |
1.4.6 温度诱导启动子 | 第48-50页 |
1.4.7 胁迫条件诱导启动子 | 第50-51页 |
第五节 特异性启动子的应用 | 第51-57页 |
1.5.1 抗虫性方面的应用 | 第51-53页 |
1.5.2 植物分化发育研究方面的应用 | 第53页 |
1.5.3 抗病毒方面的应用 | 第53-54页 |
1.5.4 创建雄性不育系和恢复系方面的应用 | 第54页 |
1.5.5 花卉改良的应用 | 第54-55页 |
1.5.6 改善作物品质和生物制药(生物反应器)的应用 | 第55-56页 |
1.5.7 在抗除草剂方面的应用 | 第56-57页 |
1.5.8 防止水果腐烂、改善水果品质的应用 | 第57页 |
第六节 绿色荧光蛋白 | 第57-60页 |
1.6.1 绿色荧光蛋白的结构特点 | 第57-58页 |
1.6.2 绿色荧光蛋白的种类 | 第58-59页 |
1.6.3 绿色荧光蛋白作为标记分子的优点 | 第59-60页 |
1.6.4 绿色荧光蛋白的应用 | 第60页 |
第七节 本研究的目的意义 | 第60-63页 |
第二章 材料与方法 | 第63-83页 |
第一节 实验材料 | 第63-68页 |
2.1.1 本工作所用菌株 | 第63页 |
2.1.2 与本文有关的质粒 | 第63-64页 |
2.1.3 所用试剂 | 第64-65页 |
2.1.4 人工合成的寡核苷酸片段 | 第65-66页 |
2.1.5 培养基 | 第66-67页 |
2.1.6 植物受体 | 第67页 |
2.1.7 水杨酸 | 第67-68页 |
第二节 实验方法 | 第68-83页 |
2.2.1 质粒DNA的小量提取 | 第68-69页 |
2.2.1.1 所涉及溶液的配制 | 第68页 |
2.2.1.2 质粒DNA的提取方法 | 第68-69页 |
2.2.2 质粒DNA的大量制备 | 第69-70页 |
2.2.3 合成序列的退火与加磷 | 第70页 |
2.2.4 九种启动子的构建路线 | 第70-73页 |
2.2.5 DNA的限制性酶切反应 | 第73页 |
2.2.6 目的片段的电泳回收 | 第73-74页 |
2.2.7 载体与DNA的连接反应 | 第74页 |
2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第74-75页 |
2.2.9 质粒DNA转化大肠杆菌 | 第75页 |
2.2.10 转化子的快速筛选 | 第75-76页 |
2.2.11 农杆菌LBA4404的转化 | 第76-77页 |
2.2.11.1 LBA4404感受态细胞的制备 | 第76页 |
2.2.11.2 重组质粒转入LBA404细胞 | 第76页 |
2.2.11.3 农杆菌质粒DNA的提取 | 第76-77页 |
2.2.12 烟草的转化 | 第77-78页 |
2.2.13 植物DNA的提取 | 第78-79页 |
2.2.14 转基因烟草的PCR检测 | 第79页 |
2.2.15 植物基因组DNA的Southern Blot | 第79-81页 |
2.2.16 转基因烟草的水杨酸诱导 | 第81-82页 |
2.2.17 烟草蛋白的提取及GFP绿色荧光发射强度的分析 | 第82-83页 |
第三章 结果与分析 | 第83-150页 |
第一节 启动子的分子设计 | 第83页 |
第二节 带有不同数目的B1元件和as-1元件的启动子载体的构建 | 第83-103页 |
3.2.1 pUC19.GFP质粒的构建 | 第84-85页 |
3.2.2 pUC35S.GFP质粒的构建 | 第85-86页 |
3.2.3 pUC2a.GFP质粒的构建 | 第86-87页 |
3.2.4 pUC4a.GFP质粒的构建 | 第87-89页 |
3.2.5 pUC1B2a.GFP质粒的构建 | 第89-90页 |
3.2.6 pUC2B2a.GFP质粒的构建 | 第90-92页 |
3.2.7 pUC4B2a.GFP质粒的构建 | 第92-93页 |
3.2.8 pUC1B4a.GFP质粒的构建 | 第93-94页 |
3.2.9 pUC2B4a.GFP质粒的构建 | 第94-96页 |
3.2.10 pUC4B4a.GFP质粒的构建 | 第96-97页 |
3.2.11 pUC1B1a.GFP质粒的构建 | 第97-99页 |
3.2.12 pUC2B1a.GFP质粒的构建 | 第99-100页 |
3.2.13 pUC4B1a.GFP质粒的构建 | 第100-103页 |
第三节 植物表达载体的构建 | 第103-110页 |
3.3.1 pBI1B1a.GFP植物表达载体的构建 | 第103-104页 |
3.3.2 pBI2B1a.GFP植物表达载体的构建 | 第104-105页 |
3.3.3 pBI4B1a.GFP植物表达载体的构建 | 第105-106页 |
3.3.4 pBI1B2a.GFP植物表达载体的构建 | 第106页 |
3.3.5 pBI2B2a.GFP植物表达载体的构建 | 第106-107页 |
3.3.6 pBI4B2a.GFP植物表达载体的构建 | 第107-108页 |
3.3.7 pBI1B4a.GFP植物表达载体的构建 | 第108页 |
3.3.8 pBI2B4a.GFP植物表达载体的构建 | 第108-109页 |
3.3.9 pBI4B4a.GFP植物表达载体的构建 | 第109-110页 |
第四节 转化农杆菌的制备及转基因烟草的获得 | 第110-113页 |
3.4.1 转化农杆菌的制备 | 第110页 |
3.4.2 各种启动子的转基因烟草植株的获得 | 第110-113页 |
第五节 各种启动子的转基因烟草植株的PCR检测 | 第113-114页 |
第六节 各种启动子的转基因烟草植株的southern blot分析 | 第114-115页 |
第七节 各种启动子在转基因烟草中的特异性表达 | 第115-133页 |
3.7.1 各种启动子的转基因烟草植株的显微镜观察 | 第115-127页 |
3.7.1.1 不同启动子在相同组织中的表达情况 | 第117-119页 |
3.7.1.2 不同启动子在不同部位的叶片中的表达情况 | 第119-122页 |
3.7.1.3 不同启动子在茎干的不同部位的表达情况 | 第122-125页 |
3.7.1.4 不同启动子在根部的表达情况 | 第125-126页 |
3.7.1.5 小结 | 第126-127页 |
3.7.2 不同启动子的转基因植株的荧光分光光度计分析 | 第127-133页 |
3.7.2.1 含有单个B1元件的不同启动子的表达情况 | 第127-128页 |
3.7.2.2 含有两个B1元件的不同启动子的表达情况 | 第128-129页 |
3.7.2.3 含有四个B1元件的不同启动子的表达情况 | 第129-131页 |
3.7.2.4 小结 | 第131-133页 |
第八节 不同启动子在水杨酸诱导后的表达水平的变化 | 第133-150页 |
3.8.1 不同启动子水杨酸诱导后的显微镜观察 | 第133-141页 |
3.8.1.1 2mM水杨酸溶液的诱导效果 | 第133-134页 |
3.8.1.2 20mM水杨酸溶液的诱导效果 | 第134-135页 |
3.8.1.3 50mM水杨酸溶液的诱导效果 | 第135-140页 |
3.8.1.3.1 水杨酸对单个B1元件启动子的诱导效果 | 第136-137页 |
3.8.1.3.2 水杨酸对两个B1元件启动子的诱导效果 | 第137页 |
3.8.1.3.3 水杨酸对四个B1元件启动子的诱导效果 | 第137-140页 |
3.8.1.4 小结 | 第140-141页 |
3.8.2 水杨酸诱导后的荧光分光光度计分析 | 第141-148页 |
3.8.2.1 水杨酸诱导单个as-1元件启动子的表达 | 第141-143页 |
3.8.2.2 水杨酸诱导两个as-1元件启动子的表达 | 第143-145页 |
3.8.2.3 水杨酸诱导四个as-1元件启动子的表达 | 第145-146页 |
3.8.2.4 水杨酸的诱导效果与启动子中as-1元件数目的关系 | 第146-148页 |
3.8.3 小结 | 第148-150页 |
第四章 结论 | 第150-152页 |
参考文献 | 第152-170页 |
本研究发表的论文 | 第170-171页 |
致谢 | 第171页 |