| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第12-16页 |
| 第2章 实验材料 | 第16-20页 |
| 2.1 主要实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.2 载体、菌株及细胞株 | 第17页 |
| 2.3 主要实验试剂 | 第17-20页 |
| 2.3.1 主要试剂盒 | 第17页 |
| 2.3.2 主要实验试剂 | 第17-18页 |
| 2.3.3 培养基及溶液 | 第18-19页 |
| 2.3.4 其他 | 第19-20页 |
| 第3章 实验方法 | 第20-40页 |
| 3.1 Tp92目的基因的扩增 | 第20-23页 |
| 3.1.1 Tp Nichols标准株全基因组DNA模板的提取 | 第20-21页 |
| 3.1.2 Tp92的引物设计 | 第21页 |
| 3.1.3 PCR扩增 | 第21-22页 |
| 3.1.4 PCR产物的纯化 | 第22-23页 |
| 3.2 构建Tp92原核表达载体 | 第23-28页 |
| 3.2.1 pET-43.1a(+)质粒的扩增与纯化 | 第23-25页 |
| 3.2.2 制备感受态细菌 | 第25-26页 |
| 3.2.3 Tp92和pET-43.1a(+)质粒的双酶切 | 第26页 |
| 3.2.4 纯化双酶切后的Tp92和pET-43.1a(+)质粒 | 第26页 |
| 3.2.5 Tp92和pET-43.1a(+)质粒的连接 | 第26-27页 |
| 3.2.6 连接产物的转化 | 第27页 |
| 3.2.7 重组质粒的筛选与鉴定 | 第27-28页 |
| 3.3 Tp92重组蛋白的表达、纯化与鉴定 | 第28-33页 |
| 3.3.1 摸索Tp92重组蛋白的最佳表达条件 | 第28页 |
| 3.3.2 Tp92重组蛋白的纯化 | 第28-30页 |
| 3.3.3 Tp92重组蛋白的浓缩 | 第30-31页 |
| 3.3.4 Tp92重组蛋白去内毒素 | 第31页 |
| 3.3.5 Western Blot鉴定 | 第31-32页 |
| 3.3.6 蛋白浓度的测定 | 第32-33页 |
| 3.4 细胞培养和传代 | 第33页 |
| 3.4.1 THP-1 细胞 | 第33页 |
| 3.4.2 HMEC-1 细胞 | 第33页 |
| 3.5 初步探索Tp92的致炎作用 | 第33-36页 |
| 3.5.1 Tp92刺激靶细胞 | 第33-35页 |
| 3.5.2 ELISA检测促炎细胞因子TNF-α、IL-6 和IL-1β 水平 | 第35-36页 |
| 3.6 ELISA检测阻断各信号通路前后各促炎细胞因子的水平变化 | 第36-37页 |
| 3.6.1 巨噬细胞 | 第36页 |
| 3.6.2 HMEC-1 细胞 | 第36-37页 |
| 3.7 Western Blot检测阻断各信号通路前后关键分子的水平变化 | 第37-38页 |
| 3.7.1 巨噬细胞 | 第37页 |
| 3.7.2 HMEC-1 细胞 | 第37-38页 |
| 3.7.3 Western Blot检测 | 第38页 |
| 3.8 LDH法检测阻断各信号通路前后靶细胞内LDH的水平变化 | 第38-40页 |
| 3.8.1 巨噬细胞 | 第38-39页 |
| 3.8.2 HMEC-1 细胞 | 第39页 |
| 3.8.3 乳酸脱氢酶检测 | 第39-40页 |
| 第4章 实验结果 | 第40-56页 |
| 4.1 Tp92目的蛋白的诱导表达与鉴定 | 第40-44页 |
| 4.1.1 Tp92基因的PCR扩增结果 | 第40页 |
| 4.1.2 Tp92/pET-43.1a(+)重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第40-41页 |
| 4.1.3 Tp92/pET-43.1a(+)重组质粒的双酶切鉴定 | 第41-42页 |
| 4.1.4 Blast比对 | 第42页 |
| 4.1.5 Tp92重组蛋白的表达 | 第42-43页 |
| 4.1.6 Tp92重组蛋白纯化、去内毒素之后的Western Blot分析 | 第43-44页 |
| 4.1.7 测定Tp92重组蛋白最终浓度 | 第44页 |
| 4.2 Tp92刺激不同时间对细胞因子分泌的影响 | 第44-47页 |
| 4.3 PDTC对Tp92诱导靶细胞分泌促炎细胞因子的影响 | 第47-48页 |
| 4.4 SB202190对Tp92诱导靶细胞分泌促炎细胞因子的影响 | 第48-50页 |
| 4.5 Z-YVAD-FMK对Csapase-1 和NLRP3的表达及促炎细胞因子的分泌的影响 | 第50-53页 |
| 4.6 LDH法检测阻断各信号通路前后靶细胞内LDH的水平变化 | 第53-56页 |
| 第5章 讨论 | 第56-62页 |
| 第6章 结论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 文献综述 | 第70-100页 |
| 梅毒螺旋体外膜蛋白 Tp92 及其同源蛋白的研究进展 | 第70-81页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| Autophagy, an inhibitor of NLRP3 inflammasome activation | 第81-100页 |
| References | 第92-100页 |
| 作者攻读学位期间的科研成果 | 第100-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
