| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 综述 | 第9-24页 |
| 1. 原始生殖细胞 | 第9-19页 |
| 1.1 原始生殖细胞的简介 | 第9-10页 |
| 1.2 原始生殖细胞的命运进程 | 第10-12页 |
| 1.3 原始生殖细胞的发育潜能 | 第12-14页 |
| 1.4 原始生殖细胞命运调控相关的转录因子 | 第14-16页 |
| 1.5 原始生殖细胞特异的转录网络 | 第16-17页 |
| 1.6 原始生殖细胞的表观重编程 | 第17-19页 |
| 1.7 总结 | 第19页 |
| 2 DAZL和BOULE基因在生殖系统的关键作用 | 第19-24页 |
| 2.1 关于DAZ家族基因的基础知识 | 第19-20页 |
| 2.2 DAZL和BOULE基因在小鼠生殖系统中的研究进展 | 第20-23页 |
| 2.3 总结 | 第23-24页 |
| 前言 | 第24-26页 |
| 3 实验材料 | 第26-31页 |
| 3.1 实验动物 | 第26页 |
| 3.2 主要仪器设备 | 第26页 |
| 3.3 实验试剂与耗材 | 第26-28页 |
| 3.4 实验主要试剂与配制 | 第28-31页 |
| 4 实验步骤与方法 | 第31-43页 |
| 4.1 小鼠饲养层细胞的建立与培养 | 第31-32页 |
| 4.1.1 CF1小鼠胎儿成纤维细胞的分离与培养 | 第31页 |
| 4.1.2 CF1小鼠成纤维细胞制作饲养层细胞 | 第31-32页 |
| 4.2 Blimp1-mVenus和Stella-ECFP转基因小鼠胚胎干细胞系的建立 | 第32-33页 |
| 4.2.1 BVSC囊胚的获得 | 第32页 |
| 4.2.2 胚胎干细胞系的建立 | 第32页 |
| 4.2.3 BVSC胚胎干细胞系的建立 | 第32-33页 |
| 4.3 质粒抽提 | 第33-34页 |
| 4.3.1 菌液的获取 | 第33-34页 |
| 4.3.2 质粒大提 | 第34页 |
| 4.4 慢病毒的包装 | 第34页 |
| 4.4.1 293T细胞扩增 | 第34页 |
| 4.4.2 脂质体转染 | 第34页 |
| 4.5 Blimp1、Prdm14、AP2γ过表达细胞系的建立 | 第34-37页 |
| 4.5.1 小鼠胚胎干细胞系的复苏、扩增 | 第35页 |
| 4.5.2 病毒感染 | 第35页 |
| 4.5.3 挑取亚克隆筛选建系 | 第35-37页 |
| 4.6 过表达DAZL和BOULE小鼠ES细胞系的建立 | 第37-38页 |
| 4.7 RNA的提取和反转录 | 第38-39页 |
| 4.7.1 总RNA的提取 | 第38页 |
| 4.7.2 反转录成cDNA | 第38-39页 |
| 4.8 Real-time PCR | 第39-40页 |
| 4.9 体外生殖分化 | 第40-41页 |
| 4.9.1 胚胎干细胞向外胚层样细胞的分化 | 第40-41页 |
| 4.9.2 EpiLCs向PGCLCs的分化 | 第41页 |
| 4.10 小鼠胚胎干细胞多能性蛋白免疫荧光染色 | 第41-42页 |
| 4.11 基因组的提取 | 第42-43页 |
| 实验结果与分析 | 第43-50页 |
| 1 Blimp1-mVenus和Stella-ECFP双报告基因的小鼠胚胎干细胞系的建立 | 第43页 |
| 2 稳定整合Blimp1、Prdml4和AP2γ的小鼠胚胎干细胞系的建立 | 第43-45页 |
| 3 DAZL和BOULE转基因的细胞系的建立 | 第45-46页 |
| 4 DAZL和BOULE加速PGCLCs的分化进程,提高PGCLCs的分化效率 | 第46-50页 |
| 讨论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
