摘要 | 第8-9页 |
英文摘要 | 第9-10页 |
1.前言 | 第11-27页 |
1.1 本研究的目的和意义 | 第11-12页 |
1.2 文献综述 | 第12-25页 |
1.2.1 植物细胞壁 | 第12-18页 |
1.2.2 番茄及其它植物甘露聚糖酶的研究进展 | 第18-19页 |
1.2.3 植物RNA干扰的研究 | 第19-23页 |
1.2.4 番茄遗传转化体系的研究 | 第23-25页 |
1.3 本研究的内容和技术路线 | 第25-27页 |
1.3.1 研究的内容 | 第25-26页 |
1.3.2 技术路线 | 第26-27页 |
2.材料与方法 | 第27-41页 |
2.1 番茄甘露聚糖酶基因家族的鉴定及生物信息学分析 | 第27页 |
2.1.1 数据库 | 第27页 |
2.1.2 分析软件和方法 | 第27页 |
2.2 番茄甘露聚糖酶基因家族组织特异性表达分析(半定量PCR) | 第27-30页 |
2.2.1 材料 | 第27-28页 |
2.2.2 方法 | 第28-30页 |
2.3 番茄甘露聚糖酶基因家族RNA干扰表达载体的构建 | 第30-35页 |
2.3.1 材料 | 第30-31页 |
2.3.2 方法 | 第31-35页 |
2.4 植物RNA干扰表达载体转化农杆菌 | 第35-36页 |
2.4.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
2.4.2 表达载体转化农杆菌(冻融法) | 第36页 |
2.4.3 Ti质粒的筛选和鉴定 | 第36页 |
2.5 番茄再生体系的建立和遗传转化 | 第36-39页 |
2.5.1 材料 | 第36-37页 |
2.5.2 方法 | 第37-39页 |
2.6 转基因植株的PCR检测 | 第39-40页 |
2.6.1 材料 | 第39页 |
2.6.2 方法 | 第39-40页 |
2.7 转基因植株的RT-PCR检测 | 第40-41页 |
2.7.1 转基因番茄RNA提取和RT-PCR | 第40-41页 |
3.结果与分析 | 第41-58页 |
3.1 番茄甘露聚糖酶基因家族 | 第41-42页 |
3.2 番茄甘露聚糖酶基因家族的生物信息学分析 | 第42-51页 |
3.2.1 染色体分布 | 第42-43页 |
3.2.2 蛋白序列比对和保守结构分析 | 第43-45页 |
3.2.3 基因结构分析 | 第45-46页 |
3.2.4 基因的亲缘关系 | 第46-47页 |
3.2.5 保守基序分析 | 第47页 |
3.2.6 植物甘露聚糖酶基因的进化分析 | 第47-48页 |
3.2.7 启动子分析 | 第48-51页 |
3.3 番茄甘露聚糖酶基因组织特异表达 | 第51-52页 |
3.4 番茄RNA干扰表达载体pTCK303-LeMANS的构建 | 第52-54页 |
3.4.1 RNA干扰靶片段的克隆 | 第52-53页 |
3.4.2 RNA干扰中间载体pTCK303-SC的构建 | 第53页 |
3.4.3 RNA干扰表达载体pTCK303-LeMANs的构建 | 第53-54页 |
3.5 番茄RNA干扰表达载体转化农杆菌 | 第54-55页 |
3.6 番茄的遗传转化 | 第55-56页 |
3.7 转基因植株的PCR和RT-PCR检测 | 第56-58页 |
3.7.1 PCR检测 | 第56页 |
3.7.2 RT-PCR检测 | 第56-58页 |
4.讨论 | 第58-63页 |
4.1 番茄甘露聚糖酶基因家族 | 第58页 |
4.2 番茄甘露聚糖酶基因的进化 | 第58-59页 |
4.3 番茄甘露聚糖酶基因的生物学功能 | 第59-60页 |
4.4 番茄RNA干扰载体构建和干扰效果 | 第60-61页 |
4.5 番茄的遗传转化 | 第61页 |
4.6 转基因植株的检测以及后期试验规划 | 第61-63页 |
5.结论 | 第63-64页 |
致谢 | 第64-65页 |
参考文献 | 第65-75页 |
附录 | 第75-77页 |
攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第77页 |