| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-16页 |
| 引言 | 第16-26页 |
| 1 研究背景 | 第16-23页 |
| ·穿心莲的基本概况 | 第16页 |
| ·穿心莲内酯类成分研究 | 第16-17页 |
| ·穿心莲二萜环合酶基因的研究 | 第17页 |
| ·植物萜类化合物生物合成途径 | 第17-19页 |
| ·萜类环合酶 | 第19-20页 |
| ·植物基因的克隆 | 第20-22页 |
| ·大肠杆菌中真核基因表达 | 第22-23页 |
| ·小结 | 第23页 |
| 2 本研究工作的总体思路、主要研究方法和预期结果 | 第23-24页 |
| 3 本研究工作技术路线图 | 第24-26页 |
| 第一章 穿心莲二萜环合酶基因(APCPS)的克隆 | 第26-54页 |
| 1 材料与方法 | 第26-42页 |
| ·材料 | 第26-30页 |
| ·方法 | 第30-42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-51页 |
| ·穿心莲RNA提取 | 第42-43页 |
| ·穿心莲二萜环合酶基因(ApCPS)核心片段的克隆 | 第43-44页 |
| ·穿心莲二萜环合酶基因(ApCPS)3’末端的克隆 | 第44-47页 |
| ·穿心莲二萜环合酶基因(ApCPS)5’末端的克隆 | 第47-49页 |
| ·穿心莲二萜环合酶基因(ApCPS)全长克隆 | 第49-51页 |
| 3 讨论 | 第51-52页 |
| ·ApCPS基因片段(核心片段、3’末端和5’末端)的扩增策略及结果 | 第51-52页 |
| ·对ApCPS基因cDNA全长克隆的策略及结果 | 第52页 |
| 4 结论 | 第52-54页 |
| 第二章 穿心莲二萜环合酶基因(APCPS)的原核表达 | 第54-72页 |
| 1 材料与方法 | 第54-60页 |
| ·材料 | 第54-56页 |
| ·方法 | 第56-60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-68页 |
| ·穿心莲二萜环合酶基因(ApCPS)片段的克隆 | 第60页 |
| ·构建重组质粒pGEX-apCPS | 第60-62页 |
| ·测序和序列分析 | 第62-64页 |
| ·ApCPS基因的原核表达 | 第64-68页 |
| 3 讨论 | 第68-71页 |
| ·构建克隆质粒和表达质粒的策略 | 第69页 |
| ·阳性重组子的鉴定 | 第69页 |
| ·测序结果的分析 | 第69-70页 |
| ·大肠杆菌的诱导表达 | 第70-71页 |
| 4 结论 | 第71-72页 |
| 结语 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
| 附录Ⅰ 相关试剂盒使用说明 | 第76-98页 |
| 附录Ⅰ-1:RNAiso~(TM) Plus(Total RNA提取试剂)使用说明 | 第76-81页 |
| 附录Ⅰ-2:iScript cDNA Synthesis Kit(Bio-Rad)反转录试剂盒使用说明 | 第81-83页 |
| 附录Ⅰ-3:Agarose Gel DNA Purification Kit(TaKaRa)DNA凝胶回收试剂盒使用说明 | 第83-85页 |
| 附录Ⅰ-4:3’-Full RACE Core Set Ver.2.0(TaKaRa)使用说明 | 第85-88页 |
| 附录Ⅰ-5:PrimcScript~(TM)反转录PCR Kit(TaKaRa)反转录试剂盒使用说明 | 第88-90页 |
| 附录Ⅰ-6:SMARTerTM RACE cDNAAmplification Kit(Clontech)使用说明 | 第90-93页 |
| 附录Ⅰ-7:PrimeScript~(TM) 1st Strand cDNA Synthesis Kit(TaKaRa)使用说明 | 第93-96页 |
| 附录Ⅰ-8:GeneJET~(TM) Plasmid Miniprep Kit(Fermentas)质粒提取试剂盒使用说明 | 第96-98页 |
| 附录Ⅱ序列比对和BLAST结果 | 第98-140页 |
| 附录Ⅱ-1:穿心莲(CPS)基因AJ973129使用Blastx进行序列比对 | 第98-100页 |
| 附录Ⅱ-2:穿心莲CPS基因核心片段使用apCPS-F1和apCPS-R1引物双向测序结果用Clustalw进行比对 | 第100-102页 |
| 附录Ⅱ-3:使用Blastn对使用apCPS-F1引物测序的穿心莲CPS核心片段基因进行分析 | 第102-103页 |
| 附录Ⅱ-4:穿心莲CPS基因3'RACE产物片段两个样测序结果用Clustalw进行比对 | 第103-107页 |
| 附录Ⅱ-5:穿心莲CPS基因3'RACE产物DNA片段测序结果用Blastx分析 | 第107-111页 |
| 附录Ⅱ-6:穿心莲CPS基因5'RACE产物片段取两个样测序结果用Clustalw进行比对 | 第111-113页 |
| 附录Ⅱ-7:穿心莲CPS基因5'RACE产物DNA片段测序结果用Blastx分析 | 第113-115页 |
| 附录Ⅱ-8:穿心莲CPS基因全长拼接序列的翻译及序列分析 | 第115-121页 |
| 附录Ⅱ-9:穿心莲CPS基因全长拼接序列和CPS基因的测序结果用Clustalw进行比对 | 第121-126页 |
| 附录Ⅱ-10:穿心莲CPS基因编码区翻译得到蛋白序列 | 第126-127页 |
| 附录Ⅱ-11:用Blastp对穿心莲CPS基因编码区翻译得到蛋白序列进行分析 | 第127-134页 |
| 附录Ⅱ-12:用Clustalw对穿心莲CPS基因序列和一致性最高的其它五种CPS基因进行比对 | 第134-140页 |
| 附录Ⅲ 本研究工作中涉及的菌株和质粒 | 第140-141页 |
| 在学期间发表的论文 | 第141-142页 |
| 致谢 | 第142页 |
