| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 第一章 引言 | 第10-21页 |
| 1.1 淀粉与普鲁兰酶 | 第10页 |
| 1.2 普鲁兰酶在工业中的应用 | 第10-11页 |
| 1.3 普鲁兰酶的研究进展 | 第11-14页 |
| 1.3.1 普鲁兰酶新基因的挖掘及异源表达 | 第11-13页 |
| 1.3.2 普鲁兰酶蛋白的分子改良 | 第13-14页 |
| 1.3.3 普鲁兰酶异源高效表达的优化 | 第14页 |
| 1.4 翻译速率与重组蛋白高效表达研究 | 第14-19页 |
| 1.4.1 调控翻译起始速率 | 第15-16页 |
| 1.4.2 调控翻译延伸速率 | 第16-19页 |
| 1.4.3 翻译速率调控重组蛋白表达量的总结与展望 | 第19页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 优化翻译速率提高普鲁兰酶表达水平 | 第21-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第21页 |
| 2.1.3 引物、试剂盒及试剂 | 第21-23页 |
| 2.1.4 相关溶液 | 第23页 |
| 2.1.5 其他 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.2.1 普鲁兰酶单点突变及组合突变体的构建 | 第24-26页 |
| 2.2.2 普鲁兰酶野生型和突变体在大肠杆菌中的诱导表达差异研究 | 第26页 |
| 2.2.3 普鲁兰酶的酶活性测定方法 | 第26-28页 |
| 2.2.4 野生型和突变体普鲁兰酶转录水平的分析 | 第28-30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-36页 |
| 2.3.1 极端稀有密码子的优化对PulB表达量的影响 | 第30-32页 |
| 2.3.2 pulb基因内类SD序列的优化对PulB表达量的影响 | 第32-33页 |
| 2.3.3 mRNA二级结构对PulB表达的影响 | 第33-34页 |
| 2.3.4 野生型和突变体普鲁兰酶转录水平的分析 | 第34-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 PulB耐热突变体构建及在地衣芽 孢杆菌系统中高效表达 | 第38-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第38页 |
| 3.1.2 引物、试剂盒及试剂 | 第38-39页 |
| 3.1.3 相关溶液 | 第39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-41页 |
| 3.2.1 突变体的构建 | 第39页 |
| 3.2.2 突变体在大肠杆菌中的诱导表达及纯化 | 第39-40页 |
| 3.2.3 SDS-PAGE蛋白电泳检测 | 第40页 |
| 3.2.4 突变体的酶学性质测定 | 第40页 |
| 3.2.5 地衣芽孢杆菌高效表达系统的构建 | 第40-41页 |
| 3.3 结果与分析 | 第41-49页 |
| 3.3.1 突变体的构建 | 第41页 |
| 3.3.2 耐热突变体的诱导及纯化 | 第41-42页 |
| 3.3.3 突变体的酶学性质测定 | 第42-46页 |
| 3.3.4 PulB在地衣芽孢杆菌中高效表达 | 第46-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-50页 |
| 3.5 本章小结 | 第50-51页 |
| 第四章 全文结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简历 | 第60页 |
