| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第15-23页 |
| 1.1 桑疫病概述 | 第15-16页 |
| 1.1.1 桑疫病病原描述 | 第15-16页 |
| 1.1.2 桑疫病致病机理 | 第16页 |
| 1.2 丁香假单胞菌的概述 | 第16-17页 |
| 1.2.1 丁香假单胞菌的描述及分类 | 第16-17页 |
| 1.2.2 丁香假单胞菌的致病机制 | 第17页 |
| 1.3 丁香假单胞菌定量方法的研究进展 | 第17-20页 |
| 1.3.1 平板计数法 | 第17页 |
| 1.3.2 叶绿素荧光成像法 | 第17-18页 |
| 1.3.3 免疫磁珠分离法 | 第18-19页 |
| 1.3.4 分子生物学法 | 第19-20页 |
| 1.4 PMA-qPCR方法概述 | 第20-21页 |
| 1.4.1 PMA的作用机理 | 第20页 |
| 1.4.2 PMA-qPCR应用于活体定量的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.5 本课题的研究意义和主要内容 | 第21-23页 |
| 1.5.1 研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第22页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第22-23页 |
| 第2章 桑疫病致病菌的快速分离 | 第23-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 样品来源 | 第23页 |
| 2.1.2 培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.3 主要溶液配制及试剂盒 | 第24-25页 |
| 2.1.4 主要实验仪器和设备 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-33页 |
| 2.2.1 取样 | 第25页 |
| 2.2.2 最佳螯合剂的选择 | 第25-26页 |
| 2.2.3 不同温度处理荧光菌株 | 第26页 |
| 2.2.4 致病性桑丁香假单胞菌的初筛 | 第26页 |
| 2.2.5 特异性基因片段的筛选 | 第26-27页 |
| 2.2.6 引物设计及特异性验证 | 第27-30页 |
| 2.2.7 致病性桑丁香假单胞菌的复筛 | 第30页 |
| 2.2.8 致病性试验 | 第30-33页 |
| 2.2.9 细胞形态学和分子生物学鉴定 | 第33页 |
| 2.2.10 统计学分析 | 第33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-45页 |
| 2.3.1 致病菌的初筛 | 第33-40页 |
| 2.3.2 致病菌的复筛 | 第40-42页 |
| 2.3.3 致病性验证 | 第42-44页 |
| 2.3.4 菌株鉴定 | 第44页 |
| 2.3.5 筛选方法比较 | 第44-45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-46页 |
| 2.5 本章小结 | 第46-48页 |
| 第3章 基于实时荧光定量PCR技术检测桑丁香假单胞菌 | 第48-62页 |
| 3.1 实验材料 | 第48-51页 |
| 3.1.1 供试菌株 | 第48页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第48-51页 |
| 3.1.3 培养基 | 第51页 |
| 3.2 主要方法 | 第51-53页 |
| 3.2.1 菌株培养和全基因组DNA提取 | 第51页 |
| 3.2.2 特异性引物的设计与合成 | 第51页 |
| 3.2.3 引物的特异性验证 | 第51-52页 |
| 3.2.4 常规PCR和qPCR检测的灵敏性试验 | 第52-53页 |
| 3.2.5 数据统计分析 | 第53页 |
| 3.3 结果与分析 | 第53-59页 |
| 3.3.1 引物的特异性验证 | 第53-54页 |
| 3.3.2 定量检测方法的比较 | 第54-58页 |
| 3.3.3 利用qPCR方法进行致病菌的动态检测 | 第58-59页 |
| 3.4 讨论 | 第59-60页 |
| 3.5 本章小结 | 第60-62页 |
| 第4章 基于PMA-qPCR方法定量活体桑丁香假单胞菌 | 第62-73页 |
| 4.1 实验材料 | 第62页 |
| 4.1.1 主要药品及试剂 | 第62页 |
| 4.1.2 主要仪器与设备 | 第62页 |
| 4.2 实验方法 | 第62-65页 |
| 4.2.1 细菌菌株和生长条件 | 第62-63页 |
| 4.2.2 选取桑树的组织样品 | 第63页 |
| 4.2.3 全细胞的热击处理 | 第63页 |
| 4.2.4 细胞的膜过滤 | 第63页 |
| 4.2.5 PMA处理条件的优化 | 第63-64页 |
| 4.2.6 荧光定量PCR | 第64页 |
| 4.2.7 qPCR和PMA-qPCR标准曲线的制定 | 第64页 |
| 4.2.8 PMA-qPCR的灵敏度检验 | 第64-65页 |
| 4.2.9 桑树叶片质量大小对PMA活性的影响 | 第65页 |
| 4.2.10 方法比较 | 第65页 |
| 4.2.11 统计学分析 | 第65页 |
| 4.3 结果与分析 | 第65-71页 |
| 4.3.1 PMA处理条件的优化 | 第65-68页 |
| 4.3.2 qPCR和PMA-qPCR标准曲线的制定 | 第68-69页 |
| 4.3.3 PMA-qPCR方法的灵敏度检验 | 第69-70页 |
| 4.3.4 桑叶质量大小对PMA-qPCR方法的影响 | 第70-71页 |
| 4.3.5 方法比较 | 第71页 |
| 4.4 讨论 | 第71-72页 |
| 4.5 本章小结 | 第72-73页 |
| 结论 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
