中文摘要 | 第7-9页 |
英文摘要 | 第9-10页 |
1 前言 | 第11-12页 |
2 实验材料 | 第12-16页 |
2.1 细胞株 | 第12页 |
2.2 药物与试剂 | 第12-13页 |
2.3 主要溶液配制 | 第13-15页 |
2.4 仪器与设备 | 第15-16页 |
2.5 数据处理及制图软件 | 第16页 |
3 实验方法 | 第16-27页 |
3.1 细胞培养 | 第16页 |
3.2 MTT实验检测细胞的增殖 | 第16-17页 |
3.3 流式细胞术检测细胞周期 | 第17-18页 |
3.4 Annexin V/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡 | 第18-19页 |
3.5 JC-1 检测线粒体膜电位 | 第19-20页 |
3.5.1 流式细胞仪检测 | 第19页 |
3.5.2 荧光显微镜检测 | 第19-20页 |
3.6 蛋白免疫印迹法检测蛋白的表达 | 第20-23页 |
3.6.1 细胞总蛋白的提取 | 第20页 |
3.6.2 BCA蛋白定量 | 第20-21页 |
3.6.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第21页 |
3.6.4 切胶和转膜 | 第21-22页 |
3.6.5 封闭和抗体孵育 | 第22页 |
3.6.6 显影 | 第22-23页 |
3.7 免疫荧光 | 第23-24页 |
3.7.1 样品的制备 | 第23页 |
3.7.2 细胞固定与通透 | 第23页 |
3.7.3 封闭与孵一抗 | 第23页 |
3.7.4 孵二抗与荧光染色 | 第23-24页 |
3.8 TRAP-PCR-ELISA法检测端粒酶活性 | 第24-27页 |
3.8.1 预处理和细胞样品的制备 | 第24-25页 |
3.8.2 端粒酶重复序列扩增(TRAP) | 第25页 |
3.8.3 抗体交联及ELISA检测 | 第25-27页 |
3.8.4 数据分析与计算 | 第27页 |
4 数据处理 | 第27页 |
5 实验结果 | 第27-46页 |
5.1 小分子化合物的设计思路 | 第27-29页 |
5.2 小分子化合物8的合成 | 第29-30页 |
5.3 化合物的结构表征 | 第30-34页 |
5.3.1 代表性化合物NMR核磁共振谱图 | 第31-34页 |
5.4 细胞毒性试验 | 第34-36页 |
5.4.1 MTT试验 | 第34-35页 |
5.4.2 形态学观察 | 第35-36页 |
5.5 细胞凋亡试验 | 第36-37页 |
5.6 化合物8对SGC-7901 细胞线粒体膜电位的影响 | 第37-39页 |
5.6.1 流式细胞仪检测 | 第38-39页 |
5.6.2 荧光显微镜检测 | 第39页 |
5.7 化合物8对SGC-7901 细胞细胞周期的影响 | 第39-41页 |
5.8 化合物8诱导SGC-7901 细胞凋亡的作用机制研究 | 第41-43页 |
5.9 化合物8对目标靶蛋白Dyskerin的作用 | 第43-45页 |
5.9.1 化合物8对Dyskerin和h TERT的蛋白水平的影响 | 第43-44页 |
5.9.2 免疫荧光对目标靶蛋白Dyskerin进行定位 | 第44-45页 |
5.10 TRAP-PCR-ELISA法检测化合物8对端粒酶活性的抑制作用 | 第45-46页 |
讨论 | 第46-47页 |
结论 | 第47页 |
参考文献 | 第47-50页 |
个人简历 | 第50-51页 |
致谢 | 第51-52页 |
综述 | 第52-60页 |
参考文献 | 第57-60页 |