| 中文摘要 | 第10-13页 |
| 英文摘要 | 第13-17页 |
| 第一部 miR-140 靶向调控Smad3基因的表达研究 | 第18-38页 |
| 前言 | 第18-19页 |
| 材料和方法 | 第19-28页 |
| 1. 材料 | 第19-22页 |
| 1.1 细胞系 | 第19页 |
| 1.2 主要实验仪器及器材 | 第19-20页 |
| 1.3 主要实验试剂 | 第20-22页 |
| 2. 方法 | 第22-28页 |
| 2.1 常规细胞培养 | 第22页 |
| 2.2 miR-140 mimics、inhibitor和Smad3si RNA转染 | 第22-23页 |
| 2.3 细胞RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.4 Taqman探针法miRNA qRT-PCR | 第24-25页 |
| 2.5 SYBR Green染料法q RT-PCR | 第25-26页 |
| 2.6 细胞蛋白提取及定量 | 第26-27页 |
| 2.7 免疫印迹Western blotting | 第27-28页 |
| 2.8 CCK8增殖实验 | 第28页 |
| 2.9 克隆形成实验 | 第28页 |
| 3. 统计学分析 | 第28页 |
| 结果 | 第28-33页 |
| 1. 荧光定量qRT-PCR检测miR-140 转染效率 | 第28-29页 |
| 2. miR-140 上调对Smad3表达的影响 | 第29-30页 |
| 3. miR-140 上调对细胞增殖的影响 | 第30-31页 |
| 4. miR-140 下调对Smad3表达的影响 | 第31-32页 |
| 5. miR-140 下调对细胞增殖的影响 | 第32-33页 |
| 讨论 | 第33-35页 |
| 结论 | 第35页 |
| 参考文献 | 第35-38页 |
| 第二部 miR-140 调控EMT的作用机制研究 | 第38-60页 |
| 前言 | 第38-40页 |
| 材料和方法 | 第40-47页 |
| 1. 材料 | 第40-42页 |
| 1.1 细胞系 | 第40页 |
| 1.2 主要实验仪器及器材 | 第40-41页 |
| 1.3 主要实验试剂 | 第41-42页 |
| 2. 方法 | 第42-46页 |
| 2.1 常规细胞培养 | 第42页 |
| 2.2 miR-140 mimics、inhibitor和Smad3siRNA转染 | 第42-43页 |
| 2.3 细胞蛋白提取及定量 | 第43-44页 |
| 2.4 免疫印迹Western blotting | 第44-45页 |
| 2.5 划痕实验 | 第45页 |
| 2.6 Transwell迁移侵袭实验 | 第45-46页 |
| 2.7 免疫荧光细胞化学 | 第46页 |
| 3. 统计学分析 | 第46-47页 |
| 结果 | 第47-52页 |
| 1. miR-140 上调对结肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响 | 第47-48页 |
| 2. miR-140 上调抑制EMT的发生 | 第48-49页 |
| 3. miR-140 下调对结肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响 | 第49-51页 |
| 4. miR-140 下调促进EMT的发生 | 第51-52页 |
| 讨论 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 第三部 miR-140 对结肠癌HCT-116 细胞裸鼠移植瘤生长和转移的抑制作用 | 第60-82页 |
| 前言 | 第60-62页 |
| 材料和方法 | 第62-73页 |
| 1. 材料 | 第62-64页 |
| 1.1 细胞系与实验动物 | 第62页 |
| 1.2 主要实验仪器及器材 | 第62-63页 |
| 1.3 主要实验试剂 | 第63-64页 |
| 2. 方法 | 第64-72页 |
| 2.1 常规细胞培养 | 第64-65页 |
| 2.2 miR-140 和shRNA-Smad3慢病毒感染 | 第65页 |
| 2.3 慢病毒感染稳定细胞株的筛选 | 第65-66页 |
| 2.4 细胞RNA的提取 | 第66页 |
| 2.5 Taqman探针法mi RNA qRT-PCR | 第66-68页 |
| 2.6 SYBR Green染料法q RT-PCR | 第68-69页 |
| 2.7 裸鼠移植瘤模型的建立 | 第69页 |
| 2.8 裸鼠转移瘤模型的建立 | 第69页 |
| 2.9 组织蛋白提取及定量 | 第69-70页 |
| 2.10 免疫印迹Western blotting | 第70-71页 |
| 2.11 组织包埋、切片 | 第71页 |
| 2.12 HE染色 | 第71-72页 |
| 2.13 免疫组织化学 | 第72页 |
| 3. 统计学分析 | 第72-73页 |
| 结果 | 第73-77页 |
| 1. miR-140 和shSmad3慢病毒表达载体感染HCT116细胞 | 第73-74页 |
| 2. miR-140 和Smad3对裸鼠结肠癌移植瘤生长的影响 | 第74-76页 |
| 3. miR-140 和Smad3对裸鼠结肠癌转移瘤生长的影响 | 第76-77页 |
| 讨论 | 第77-79页 |
| 结论 | 第79页 |
| 参考文献 | 第79-82页 |
| 综述 | 第82-92页 |
| 参考文献 | 第87-92页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第92-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
