| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 英文缩略词中英注释表 | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-23页 |
| 1.1 H.pylori简述 | 第15页 |
| 1.2 参与H.pylori相关性胃炎发生的主要毒力因子 | 第15-17页 |
| 1.3 参与H.pylori相关性胃炎发生的差异表达基因 | 第17-19页 |
| 1.3.1 异常表达的miRNAs与H.pylori相关性胃炎发生的关系 | 第17页 |
| 1.3.2 异常表达的Lnc RNAs与H.pylori相关性胃炎发生的关系 | 第17-19页 |
| 1.4 炎症相关蛋白A20的研究 | 第19-23页 |
| 1.4.1 A20的生物学特性 | 第19页 |
| 1.4.2 A20在组织中的表达 | 第19-20页 |
| 1.4.3 A20与疾病的关系 | 第20-21页 |
| 1.4.4 A20与病原微生物 | 第21-23页 |
| 第二章 研究目的、方法、技术路线及意义 | 第23-26页 |
| 2.1 研究目的 | 第23页 |
| 2.2 研究方法 | 第23-24页 |
| 2.3 技术路线 | 第24-25页 |
| 2.3.1 H.pylori感染组织及细胞中A20、miR-29a-3p的表达分析 | 第24页 |
| 2.3.2 H.pylori、miR-29a-3p、A20三者间调控关系的研究 | 第24-25页 |
| 2.3.3 A20通过NF-κB参与H.pylori诱导的炎症反应 | 第25页 |
| 2.4 研究意义 | 第25-26页 |
| 第三章 H.pylori感染组织及细胞中A20、mi R-29a-3p表达分析 | 第26-41页 |
| 3.1 材料 | 第26-30页 |
| 3.1.1 组织标本采集 | 第26-27页 |
| 3.1.2 细胞和菌株 | 第27页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第27-28页 |
| 3.1.4 主要溶液配制 | 第28-29页 |
| 3.1.5 主要仪器及耗材 | 第29-30页 |
| 3.2 方法 | 第30-34页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第30-31页 |
| 3.2.2 细菌培养 | 第31页 |
| 3.2.3 细胞与H.pylori 26695共培养 | 第31页 |
| 3.2.4 免疫组织化学 | 第31-32页 |
| 3.2.5 Western blot | 第32页 |
| 3.2.6 组织和细胞总RNA提取 | 第32-33页 |
| 3.2.7 miRNA逆转录 | 第33页 |
| 3.2.8 miRNA定量 | 第33-34页 |
| 3.2.9 统计学处理 | 第34页 |
| 3.3 结果 | 第34-38页 |
| 3.3.1 A20在H.pylori感染阳性胃黏膜组织中的表达 | 第34-35页 |
| 3.3.2 H.pylori感染细胞模型中A20蛋白表达 | 第35-36页 |
| 3.3.3 A20在H.pylori不同感染时间及浓度下的表达分析 | 第36页 |
| 3.3.4 细胞及组织标本总RNA完整性及纯度检测 | 第36-37页 |
| 3.3.5 H.pylori感染的胃黏膜组织中miR-29a-3p的表达 | 第37-38页 |
| 3.3.6 H.pylori感染细胞模型中miR-29a-3p的表达 | 第38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-41页 |
| 第四章 H. pylori感染中H. pylori、miR-29a-3p、A20三者间作用关系验证 | 第41-55页 |
| 4.1 材料 | 第41-43页 |
| 4.1.1 菌株、细胞和质粒 | 第41-42页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第42页 |
| 4.1.3 主要溶液配制 | 第42-43页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第43页 |
| 4.2 方法 | 第43-49页 |
| 4.2.1 miR-29a-3p靶基因预测 | 第43页 |
| 4.2.2 寡核苷酸片段设计 | 第43-44页 |
| 4.2.3 互补寡核苷酸退火 | 第44页 |
| 4.2.4 空psiCHECK-2 载体双酶切 | 第44-45页 |
| 4.2.5 psiCHECK-2 双酶切产物胶回收 | 第45页 |
| 4.2.6 T-4 连接反应 | 第45页 |
| 4.2.7 感受态细胞制备 | 第45-46页 |
| 4.2.8 连接产物转化DH5α感受态细胞 | 第46页 |
| 4.2.9 重组质粒鉴定 | 第46页 |
| 4.2.10 质粒提取 | 第46-47页 |
| 4.2.11 质粒与miRNA共转染 | 第47-48页 |
| 4.2.12 荧光素酶活性检测 | 第48页 |
| 4.2.13 miRNA（mimics/inhibitors）转染 | 第48页 |
| 4.2.14 统计学处理 | 第48-49页 |
| 4.3 结果 | 第49-52页 |
| 4.3.1 miR-29a-3p与A20 mRNA3'UTR结合位点预测 | 第49页 |
| 4.3.2 双荧光素酶报告载体的构建与鉴定 | 第49-50页 |
| 4.3.3 miR-29a-3p与A20 mRNA3'UTR结合位点的验证 | 第50-51页 |
| 4.3.4 miR-29a-3p在转录后水平抑制A20蛋白表达的验证 | 第51-52页 |
| 4.3.5 在H.pylori感染中H.pylori、miR-29a-3p、A20三者间作用关系的验证 | 第52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-55页 |
| 第五章 初步探索A20在H.pylori诱导的胃相关性炎症中的作用机制 | 第55-66页 |
| 5.1 材料 | 第55-56页 |
| 5.1.1 细胞及质粒 | 第55页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第55-56页 |
| 5.1.3 主要仪器及耗材 | 第56页 |
| 5.2 方法 | 第56-59页 |
| 5.2.1 siRNA瞬时转染 | 第56-57页 |
| 5.2.2 质粒转染 | 第57页 |
| 5.2.3 mRNA逆转录 | 第57-58页 |
| 5.2.4 荧光定量PCR | 第58-59页 |
| 5.2.5 免疫荧光 | 第59页 |
| 5.2.6 ELISA检测 | 第59页 |
| 5.3 结果 | 第59-63页 |
| 5.3.1 A20 siRNA干扰效果验证 | 第59-60页 |
| 5.3.2 A20对phosphorylated NF-κB p65及NF-κB p65表达的影响 | 第60-61页 |
| 5.3.3 A20对NF-κB p65核转位影响 | 第61页 |
| 5.3.4 A20对NF-κB p65下游炎症因子IL-6/IL-8 的表达影响 | 第61-62页 |
| 5.3.5 A20对H.pylori感染诱导的IL-6/IL-8 表达的影响 | 第62-63页 |
| 5.4 讨论 | 第63-66页 |
| 第六章 主要结论及展望 | 第66-67页 |
| 6.1 主要结论 | 第66页 |
| 6.2 主要展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
