| 摘要 | 第9-15页 |
| ABSTRACT | 第15-21页 |
| 第1章 前言 | 第22-33页 |
| 1.1 microRNA简介 | 第22-26页 |
| 1.1.1 microRNA的发现 | 第23页 |
| 1.1.2 microRNA的合成 | 第23-24页 |
| 1.1.3 microRNA的功能 | 第24-26页 |
| 1.2 microRNA与肿瘤 | 第26-30页 |
| 1.2.1 Micro RNA 和肿瘤的发生发展 | 第26-27页 |
| 1.2.2 Micro RNA 作为癌基因（oncogene）或抑癌基因（tumor suppressorgene） | 第27-29页 |
| 1.2.3 microRNA与肝癌 | 第29-30页 |
| 1.3 microRNA研究现状 | 第30-32页 |
| 1.4 本文研究内容 | 第32-33页 |
| 第2章 微小RNA(micro RNA)在肝癌复发和细胞上皮-间质转换（EMT）中的作用 | 第33-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-35页 |
| 2.1.1 细胞和试剂 | 第33-34页 |
| 2.1.2 溶液配制 | 第34-35页 |
| 2.1.3 仪器设备及耗材 | 第35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-38页 |
| 2.2.1 细胞冻存 | 第35页 |
| 2.2.2 细胞复苏 | 第35页 |
| 2.2.3 细胞传代及培养 | 第35-36页 |
| 2.2.4 总 RNA 抽提和提纯 | 第36页 |
| 2.2.5 micro RNA 芯片筛选差异表达 | 第36页 |
| 2.2.6 RT-PCR 验证差异表达的 microRNA | 第36-37页 |
| 2.2.7 miRNA靶点预测 | 第37页 |
| 2.2.8 micro RNA mimic 或抑制剂的转染 | 第37页 |
| 2.2.9 MTS | 第37-38页 |
| 2.2.10 Annexin V-PI检测细胞凋亡 | 第38页 |
| 2.2.11 Transwell实验 | 第38页 |
| 2.2.12 数据统计 | 第38页 |
| 2.3 实验结果 | 第38-43页 |
| 2.3.1 总RNA提取质量 | 第38-39页 |
| 2.3.2 差异表达的miRNA | 第39-41页 |
| 2.3.3 Real—time PCR 验证芯片结果 | 第41页 |
| 2.3.4 microRNA 靶基因的预测 | 第41-43页 |
| 2.3.5 miRNA-489在人类基因组中位置 | 第43页 |
| 2.3.6 micro RNA-205 在基因组中位置 | 第43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-44页 |
| 2.5 本章小结 | 第44-45页 |
| 第 3 章 Mi RNA-489 在调控肝癌复发和 EMT 转换中的作用和机制 | 第45-60页 |
| 3.1 实验材料 | 第45页 |
| 3.1.1 细胞和试剂 | 第45页 |
| 3.1.2 溶液配制 | 第45页 |
| 3.1.3 仪器设备和耗材 | 第45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-50页 |
| 3.2.1miRNA靶点预测 | 第45页 |
| 3.2.2 Smad3载体构建 | 第45-48页 |
| 3.2.3 Real-time 定量 PCR | 第48-49页 |
| 3.2.4 MTS 检测细胞抑制率 | 第49页 |
| 3.2.5 Western-Blot | 第49-50页 |
| 3.2.6 Transwell侵袭实验 | 第50页 |
| 3.3 实验结果 | 第50-56页 |
| 3.3.1 miRNA-489靶点预测 | 第50页 |
| 3.3.2 验证 mi RNA-489 下游靶点 Smad3 | 第50-51页 |
| 3.3.3 mi RNA-489 导致肝癌复发和转移及 EMT 转换的机制 | 第51-54页 |
| 3.3.4 EMT相关蛋白的检测 | 第54-55页 |
| 3.3.5 细胞功能改变 | 第55-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-59页 |
| 3.5 本章小结 | 第59-60页 |
| 第 4 章 mi RNA-205 与肝癌干细胞特性的维持 | 第60-69页 |
| 4.1 实验材料 | 第60-61页 |
| 4.1.1 试剂和细胞 | 第60页 |
| 4.1.2 仪器设备和耗材 | 第60-61页 |
| 4.2 实验方法 | 第61页 |
| 4.2.1 组织及细胞培养 | 第61页 |
| 4.2.2 Real-time 定量 PCR | 第61页 |
| 4.2.3 MTS 检测细胞抑制率 | 第61页 |
| 4.2.4 Western-blot | 第61页 |
| 4.3 结果 | 第61-66页 |
| 4.3.1 miRNA-205下游靶点预测 | 第61-62页 |
| 4.3.2 验证miRNA-205下游靶点 | 第62-63页 |
| 4.3.3 miRNA-205导致肝癌转移的机制 | 第63-64页 |
| 4.3.4 CD24+细胞群体 | 第64-65页 |
| 4.3.5 miRNA-205和PLCβ1 的临床意义 | 第65-66页 |
| 4.4 讨论 | 第66-67页 |
| 4.5 本章小结 | 第67-69页 |
| 第5章 结论和展望 | 第69-71页 |
| 5.1 结论 | 第69-70页 |
| 5.2 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 附录 | 第76-77页 |
| 综述 | 第77-85页 |
| 参考文献 | 第82-85页 |
