| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略词 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1 引言 | 第13-23页 |
| 1.1 HSP的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2 热激蛋白的种类 | 第15-17页 |
| 1.2.1 HSP100家族 | 第15-16页 |
| 1.2.2 HSP90家族 | 第16页 |
| 1.2.3 HSP70家族 | 第16-17页 |
| 1.2.4 sHSP家族 | 第17页 |
| 1.3 HSP的功能 | 第17-20页 |
| 1.3.1 HSP具有分子伴侣作用 | 第17-18页 |
| 1.3.2 HSP与植物的耐热性 | 第18-19页 |
| 1.3.3 HSP与植物的抗冷性 | 第19页 |
| 1.3.4 HSP调节细胞凋亡功能 | 第19-20页 |
| 1.4 转基因技术的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.4.1 转基因技术的种类 | 第20-21页 |
| 1.4.2 转基因技术的应用 | 第21-22页 |
| 1.5 本研究目的意义 | 第22-23页 |
| 第二章 小分子量热激蛋白基因sHSP7的克隆和表达模式分析 | 第23-49页 |
| 1 材料与方法 | 第24-36页 |
| 1.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 1.1.1 植物材料的准备 | 第24页 |
| 1.1.2 菌种、质粒与试剂 | 第24页 |
| 1.1.3 常用试剂和培养基 | 第24-25页 |
| 1.1.4 引物合成 | 第25-26页 |
| 1.2 试验方法 | 第26-36页 |
| 1.2.1 陆地棉总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 1.2.2 RNA浓度定量与完整性检测 | 第27页 |
| 1.2.3 普通反转录cDNA的合成 | 第27页 |
| 1.2.4 目的基因全长cDNA的分离 | 第27-34页 |
| 1.2.4.1 中间片段的获得 | 第27-29页 |
| 1.2.4.2 目的基因cDNA 3'端片段的分离(3'-RACE) | 第29-31页 |
| 1.2.4.3 目的基因cDNA 5'端片段的分离(5'-RACE) | 第31-33页 |
| 1.2.4.4 目的基因全长cDNA的克隆 | 第33-34页 |
| 1.2.5 目的基因基因组全长的获得 | 第34-35页 |
| 1.2.5.1 棉花基因组DNA的提取 | 第34页 |
| 1.2.5.2 基因组PCR | 第34-35页 |
| 1.2.6 生物信息学分析 | 第35-36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-43页 |
| 2.1 sHSP7的3'末端扩增及测序分析 | 第36页 |
| 2.2 sHSP7的5'末端扩增及测序分析 | 第36-37页 |
| 2.3 cDNA序列全长的分离及克隆 | 第37页 |
| 2.4 DNA序列全长的分离及克隆 | 第37-38页 |
| 2.5 生物信息学分析 | 第38-43页 |
| 2.5.1 sHSP7的生物信息学分析 | 第38-43页 |
| 3 sHSP7基因表达模式的分析 | 第43-46页 |
| 3.1 植物材料的准备 | 第43-44页 |
| 3.2 引物合成 | 第44页 |
| 3.3 半定量RT-PCR | 第44页 |
| 3.4 荧光定量PCR | 第44-45页 |
| 3.5 结果与分析 | 第45-46页 |
| 3.5.1 sHSP7的RT-PCR | 第45-46页 |
| 3.5.2 sHSP7的荧光定量PCR | 第46页 |
| 4. 结论与讨论 | 第46-49页 |
| 第三章 小分子量热激蛋白基因sHSP8的克隆和表达模式分析 | 第49-65页 |
| 1 材料与方法 | 第50-52页 |
| 1.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 1.1.1 植物材料的准备 | 第50页 |
| 1.1.2 菌种、质粒与试剂 | 第50页 |
| 1.1.3 常用试剂和培养基 | 第50页 |
| 1.1.4 引物合成 | 第50-51页 |
| 1.2 试验方法 | 第51-52页 |
| 1.2.1 陆地棉总RNA的提取 | 第51页 |
| 1.2.2 RNA浓度定量与完整性检测 | 第51页 |
| 1.2.3 普通反转录cDNA的合成 | 第51页 |
| 1.2.4 目的基因全长cDNA的分离 | 第51-52页 |
| 1.2.5 目的基因基因组全长的获得 | 第52页 |
| 1.2.6 生物信息学分析 | 第52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-59页 |
| 2.1 sHSP8的3'末端扩增及测序分析 | 第52-53页 |
| 2.2 sHSP8的5'末端扩增及测序分析 | 第53页 |
| 2.3 cDNA序列全长的分离及克隆 | 第53-54页 |
| 2.4 DNA序列全长的分离及克隆 | 第54页 |
| 2.5 生物信息学分析 | 第54-59页 |
| 2.5.1 sHSP8的生物信息学分析 | 第54-59页 |
| 3 sHSP8基因表达模式的分析 | 第59-61页 |
| 3.1 植物材料的准备 | 第59页 |
| 3.2 引物合成 | 第59-60页 |
| 3.3 半定量RT-PVR | 第60页 |
| 3.4 荧光定量PCR | 第60页 |
| 3.5 结果与分析 | 第60-61页 |
| 3.5.1 sHSP8的RT-PCR | 第60-61页 |
| 3.5.2 sHSP8的荧光定量PCR | 第61页 |
| 4. 结论与讨论 | 第61-65页 |
| 第四章 陆地棉sHSP7和sHSP8基因烟草的转化 | 第65-75页 |
| 1 材料与方法 | 第66-69页 |
| 1.1 实验材料 | 第66页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第66页 |
| 1.3 酶及生物试剂 | 第66页 |
| 1.4 构建过表达载体的PCR引物 | 第66页 |
| 1.5 实验方法 | 第66-69页 |
| 1.5.1 质粒DNA的提取 | 第66页 |
| 1.5.2 植物表达载体的构建 | 第66-67页 |
| 1.5.3 农杆菌介导烟草的遗传转化 | 第67-68页 |
| 1.5.4 转基因烟草植株的PCR检测 | 第68-69页 |
| 1.5.6 高温诱导下T0代烟草和野生型烟草的叶片的丙二醛(MDA)含量的测定 | 第69页 |
| 2 结果与分析 | 第69-73页 |
| 2.1 PBI121重组载体的检测 | 第69-70页 |
| 2.2 转sHSP7和sHSP8基因烟草植株的阳性鉴定 | 第70-72页 |
| 2.3 转sHSP7和sHSP8基因烟草植株的叶绿素含量的测定 | 第72页 |
| 2.4 转sHSP7和sHSP8基因烟草植株的丙二醛(MDA)含量的测定 | 第72-73页 |
| 3 结论与讨论 | 第73-75页 |
| 全文结论和进一步的工作展望 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
