| 摘要 | 第5-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 第一章 绪论 | 第22-48页 |
| 1.1 SAM概述 | 第22-23页 |
| 1.2 SAM的合成代谢(生物学功能)及临床应用 | 第23-27页 |
| 1.2.1 SAM的合成代谢(生物学功能) | 第23-25页 |
| 1.2.2 SAM的临床应用 | 第25-27页 |
| 1.3 SAM的生产方法 | 第27-29页 |
| 1.4 SAM合成酶催化合成SAM的研究 | 第29-37页 |
| 1.4.1 SAM合成酶的结构 | 第29-32页 |
| 1.4.2 SAM合成酶的催化机理 | 第32-34页 |
| 1.4.3 蛋白质三维结构研究 | 第34-37页 |
| 1.5 嗜热菌及嗜热酶研究进展 | 第37-40页 |
| 1.5.1 嗜热菌 | 第37页 |
| 1.5.2 嗜热酶 | 第37-40页 |
| 1.6 酶的固定化 | 第40-45页 |
| 1.6.1 固定化方法简介 | 第41-42页 |
| 1.6.2 固定化载体 | 第42页 |
| 1.6.3 碳纳米管载体 | 第42-45页 |
| 1.7 本课题研究的意义和内容 | 第45-48页 |
| 第二章 大肠杆菌来源SAM合成酶的表达及合成SAM研究 | 第48-80页 |
| 2.1 引言 | 第48页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第48-49页 |
| 2.2.1 菌种和质粒 | 第48-49页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第49页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第49页 |
| 2.2.4 培养基和主要溶液的配制 | 第49页 |
| 2.3 实验方法 | 第49-61页 |
| 2.3.1 重组菌的构建 | 第49-56页 |
| 2.3.2 SAM合成酶的IPTG诱导表达 | 第56-57页 |
| 2.3.3 蛋白的测定 | 第57页 |
| 2.3.4 蛋白电泳检测metK的表达量 | 第57-59页 |
| 2.3.5 酶活测定 | 第59-60页 |
| 2.3.6 SAM合成酶培养条件的优化 | 第60页 |
| 2.3.7 SAM合成酶酶促反应条件的优化 | 第60-61页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第61-78页 |
| 2.4.1 SAM合成酶基因metK的克隆 | 第61-62页 |
| 2.4.2 T载体连接及测序分析 | 第62-63页 |
| 2.4.3 重组质粒pET-22b(+)-metK的构建 | 第63-66页 |
| 2.4.4 重组蛋白诱导表达 | 第66-68页 |
| 2.4.5 酶反应进程 | 第68-69页 |
| 2.4.6 载空质粒pET22b和目的基因重组菌表达酶活比较 | 第69页 |
| 2.4.7 SAM合成酶metK的重组大肠杆菌培养条件的优化 | 第69-73页 |
| 2.4.8 metK酶酶促反应条件的优化 | 第73-77页 |
| 2.4.9 SAM合成酶metk酶学性质 | 第77-78页 |
| 2.5 本章小结 | 第78-80页 |
| 第三章 嗜热来源SAM合成酶的表达及表征 | 第80-102页 |
| 3.1 引言 | 第80页 |
| 3.2 实验材料和仪器 | 第80-82页 |
| 3.2.1 菌种和质粒 | 第80页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第80页 |
| 3.2.3 主要仪器设备 | 第80-81页 |
| 3.2.4 培养基和主要溶液的配制 | 第81-82页 |
| 3.3 实验方法 | 第82-86页 |
| 3.3.1 重组菌的构建 | 第82页 |
| 3.3.2 目的蛋白的表达 | 第82-83页 |
| 3.3.3 Ni柱亲和层析纯化 | 第83页 |
| 3.3.4 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第83页 |
| 3.3.5 凝胶层析 | 第83-85页 |
| 3.3.6 亲和层析柱的处理 | 第85页 |
| 3.3.7 蛋白含量测定 | 第85-86页 |
| 3.3.8 MATTt酶活力测定 | 第86页 |
| 3.3.9 HPLC法定量SAM含量 | 第86页 |
| 3.3.10 酶稳定性测定 | 第86页 |
| 3.3.11 离子偏好性测定 | 第86页 |
| 3.3.12 酶的米氏常数的测定 | 第86页 |
| 3.3.13 CD光谱 | 第86页 |
| 3.3.14 MATTt培养条件的优化 | 第86页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第86-100页 |
| 3.4.1 系统发育分析 | 第86-88页 |
| 3.4.2 重组菌的构建 | 第88-89页 |
| 3.4.3 异源表达和纯化 | 第89-91页 |
| 3.4.4 蛋白含量测定 | 第91-92页 |
| 3.4.5 酶反应进程 | 第92-93页 |
| 3.4.6 MATTt酶活测定 | 第93页 |
| 3.4.7 MATTt酶反应条件的优化 | 第93-96页 |
| 3.4.8 MATTt酶酶学性质 | 第96-99页 |
| 3.4.9 培养条件的优化 | 第99-100页 |
| 3.5 本章小结 | 第100-102页 |
| 第四章 MATTt蛋白的结晶与晶体结构解析 | 第102-124页 |
| 4.1 引言 | 第102页 |
| 4.2 实验材料和仪器 | 第102页 |
| 4.2.1 菌种 | 第102页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第102页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第102页 |
| 4.2.4 培养基及溶液配制 | 第102页 |
| 4.3 实验方法 | 第102-104页 |
| 4.3.1 MATTt蛋白的表达与纯化方法 | 第102页 |
| 4.3.2 MATTt的结晶与晶体优化方法 | 第102-104页 |
| 4.3.3 MATTt的晶体防冻液的配制 | 第104页 |
| 4.3.4 MATTt的晶体结构解析方法 | 第104页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第104-121页 |
| 4.4.1 MATTt蛋白的表达与纯化结果 | 第104-105页 |
| 4.4.2 MATTt蛋白的结晶与晶体优化结果 | 第105-110页 |
| 4.4.3 MATTt蛋白晶体的X射线衍射与结构解析 | 第110-113页 |
| 4.4.4 MATTt的晶体结构分析 | 第113-121页 |
| 4.5 本章小结 | 第121-124页 |
| 第五章 碳纳米管固定化MATTt的研究 | 第124-138页 |
| 5.1 引言 | 第124页 |
| 5.2 实验材料和仪器 | 第124页 |
| 5.2.1 酶溶液 | 第124页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第124页 |
| 5.2.3 主要仪器设备 | 第124页 |
| 5.2.4 主要溶液的配制 | 第124页 |
| 5.3 实验方法 | 第124-128页 |
| 5.3.1 MATTt纯酶液制备 | 第124-125页 |
| 5.3.2 蛋白含量的测定方法 | 第125页 |
| 5.3.3 酶活测定方法 | 第125-126页 |
| 5.3.4 碳纳米管的功能化 | 第126页 |
| 5.3.5 MATTt的固定化 | 第126-127页 |
| 5.3.6 固定化酶MWCNTs-MATTt相关性质的测定 | 第127-128页 |
| 5.3.7 载体及固定化酶MWCNTs-MATTt的性能表征 | 第128页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第128-136页 |
| 5.4.1 固定化酶MWCNTs-MATTt中酶的固定量及酶活保持率 | 第128-129页 |
| 5.4.2 固定化酶MWCNTs-MATTs的最适反应pH值 | 第129-130页 |
| 5.4.3 固定化酶MWCNTs-MATTs pH稳定性考察 | 第130页 |
| 5.4.4 固定化酶MWCNTs-MATTs的最适反应温度 | 第130-131页 |
| 5.4.5 使用批次对固定化酶MWCNTs-MATTs酶活的影响 | 第131页 |
| 5.4.6 傅立叶变换红外光谱分析 | 第131-132页 |
| 5.4.7 透射电镜观察 | 第132-133页 |
| 5.4.8 X-射线衍射图谱分析 | 第133页 |
| 5.4.9 X射线光电子能谱(XPS)分析 | 第133-135页 |
| 5.4.10 拉曼光谱分析 | 第135-136页 |
| 5.5 本章小结 | 第136-138页 |
| 第六章 结论与建议 | 第138-140页 |
| 6.1 主要结论 | 第138-139页 |
| 6.2 创新点 | 第139页 |
| 6.3 建议与展望 | 第139-140页 |
| 参考文献 | 第140-152页 |
| 附录一 | 第152-154页 |
| 附录二 | 第154-156页 |
| 附录三 | 第156-160页 |
| 致谢 | 第160-162页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第162-164页 |
| 作者和导师简介 | 第164-165页 |
| 北京化工大学博士研究生学位论义答辩委员会决议书 | 第165-166页 |
