| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 肿瘤概述 | 第11-15页 |
| 1.2 肝细胞癌研究概述 | 第15-17页 |
| 1.3 microRNA的研究背景 | 第17-21页 |
| 第2章 let-7f在肝癌中的表达情况研究 | 第21-27页 |
| 2.1 引言 | 第21-23页 |
| 2.1.1 肿瘤相关的miRNA研究 | 第21-22页 |
| 2.1.2 let-7家族简介 | 第22-23页 |
| 2.2 材料与方法 | 第23-24页 |
| 2.2.1 提取肝癌细胞系microRNA | 第23页 |
| 2.2.2 miRNA的逆转录与实时定量PCR | 第23-24页 |
| 2.3 实验结果 | 第24-26页 |
| 2.3.1 文献调研及数据库数据分析 | 第24-25页 |
| 2.3.2 let-7f在肝癌细胞系中低表达 | 第25-26页 |
| 2.4 本章小结 | 第26-27页 |
| 第3章 低表达let-7f促进肝癌增殖与转移能力 | 第27-41页 |
| 3.1 引言 | 第27-28页 |
| 3.1.1 常用的肿瘤增殖体外模型 | 第27-28页 |
| 3.1.2 常用的研究肿瘤转移的体外模型 | 第28页 |
| 3.2 材料与方法 | 第28-36页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第29页 |
| 3.2.2 转染 | 第29-31页 |
| 3.2.3 细胞计数实验 | 第31页 |
| 3.2.4 细胞活力检测(MTT assay) | 第31-33页 |
| 3.2.5 Transwell迁移实验(migration assay) | 第33-34页 |
| 3.2.6 Transwell侵袭实验(invasion assay) | 第34-35页 |
| 3.2.7 软琼脂克隆形成实验(soft agar assay) | 第35-36页 |
| 3.3 实验结果 | 第36-39页 |
| 3.3.1 let-7f低表达促进肝癌细胞的增殖 | 第36-38页 |
| 3.3.2 过表达let-7f体外明显抑制肝癌细胞的侵袭和迁移 | 第38-39页 |
| 3.4 本章小结 | 第39-41页 |
| 第4章 let-7下游作用靶点的研究 | 第41-59页 |
| 4.1 引言 | 第41-43页 |
| 4.1.1 microRNA下游靶点研究的方法 | 第41-42页 |
| 4.1.2 c-Met在肿瘤发生发展过程中的作用 | 第42-43页 |
| 4.2 材料与方法 | 第43-51页 |
| 4.2.1 细胞总RNA提取 | 第43-44页 |
| 4.2.2 RT-PCR及Q-PCR | 第44-45页 |
| 4.2.3 免疫印迹(western blot) | 第45-48页 |
| 4.2.4 3'UTR克隆 | 第48-50页 |
| 4.2.5 Iuciferase assay | 第50-51页 |
| 4.3 实验结果 | 第51-58页 |
| 4.3.1 let-7f下游靶点的预测 | 第51-54页 |
| 4.3.2 荧光素酶报告实验验证靶点 | 第54页 |
| 4.3.3 Q-PCR与western blot验证靶点 | 第54-55页 |
| 4.3.4 let-7f可以抑制c-Met的表达从而抑制肝癌的增殖和转移 | 第55-58页 |
| 4.4 本章小结 | 第58-59页 |
| 第5章 建立let-7f过表达稳转细胞系并且验证功能 | 第59-63页 |
| 5.1 引言 | 第59页 |
| 5.2 材料与方法 | 第59-60页 |
| 5.2.1 pri-let-7表达质粒构建与稳转细胞的建立 | 第59-60页 |
| 5.3 实验结果 | 第60-62页 |
| 5.3.1 let-7f过表达稳转细胞系的建立 | 第60-61页 |
| 5.3.2 let-7f过表达稳转细胞系的功能的验证的 | 第61-62页 |
| 5.4 本章小结 | 第62-63页 |
| 第6章 总结与讨论 | 第63-67页 |
| 6.1 现有的实验结果分析 | 第63页 |
| 6.2 生物信息学预测 | 第63-65页 |
| 6.2.1 富集分析 | 第63-64页 |
| 6.2.2 COSMIC数据库寻找有可能存在互作的IncRNA | 第64-65页 |
| 6.3 后续试验计划 | 第65-66页 |
| 6.3.1 在体内验证过表达let-7f对于肝癌细胞增殖转移的影响 | 第65页 |
| 6.3.2 设计实验验证生物信息学预测 | 第65-66页 |
| 6.4 全文小结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-69页 |
| 附录 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
