| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 植物LON蛋白酶研究进展 | 第13-22页 |
| 1 蓝莓关于逆境的研究 | 第13-14页 |
| 2 逆境与活性氧(ROS)的关系 | 第14-15页 |
| 3 LON蛋白酶的结构和功能 | 第15-20页 |
| 3.1 LON蛋白酶的结构 | 第15-16页 |
| 3.2 LON蛋白酶降解蛋白的功能 | 第16页 |
| 3.3 微生物、哺乳动物中LON蛋白酶的研究 | 第16-17页 |
| 3.4 植物LON蛋白酶的研究 | 第17-20页 |
| 3.4.1 植物LON蛋白酶基因家族 | 第17-18页 |
| 3.4.2 植物中LON蛋白酶的功能 | 第18-20页 |
| 4 本课题研究目的及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 蓝莓VcLON2基因分离与表达 | 第22-31页 |
| 1 前言 | 第22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-25页 |
| 2.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.2 试剂和材料 | 第22-23页 |
| 2.3 RNA提取 | 第23页 |
| 2.4 cDNA的合成 | 第23页 |
| 2.5 VcLON2基因的克隆及生物信息学分析 | 第23-24页 |
| 2.6 VcLON2基因的表达分析 | 第24-25页 |
| 2.7 非生物胁迫对蓝莓的影响 | 第25页 |
| 2.7.1 非生物胁迫下VcLON2的表达情况 | 第25页 |
| 2.7.2 非生物胁迫下相关生理指标的测定 | 第25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-29页 |
| 3.1 蓝莓不同组织总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 3.2 VcLON2基因的克隆及生物信息学分析 | 第26-28页 |
| 3.3 VcLON2在蓝莓器官发育过程中和逆境下的表达模式 | 第28-29页 |
| 4 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 本氏烟的遗传转化研究VcLON2基因功能 | 第31-45页 |
| 1 前言 | 第31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-36页 |
| 2.1 植物材料 | 第31页 |
| 2.2 载体和菌株 | 第31-32页 |
| 2.3 试剂 | 第32页 |
| 2.4 蓝莓VcLON2超表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.4.1 克隆蓝莓VcLON2的开放阅读框(ORF) | 第32页 |
| 2.4.2 将克隆得到的蓝莓VcLON2连接至植物表达载体pSH737 | 第32-33页 |
| 2.5 农杆菌介导法将VcLON2遗传转化本氏烟 | 第33-34页 |
| 2.5.1 本氏烟种子的播种 | 第33页 |
| 2.5.2 外植体的剪取及预培养 | 第33页 |
| 2.5.3 侵染菌液的准备 | 第33页 |
| 2.5.4 侵染和共培养 | 第33页 |
| 2.5.5 筛选及继代培养 | 第33-34页 |
| 2.5.6 生根培养 | 第34页 |
| 2.5.7 VcLON2转化本氏烟抗性植株的检测 | 第34页 |
| 2.6 叶盘法检测VcLON2转化植株对逆境的抗性 | 第34页 |
| 2.7 逆境胁迫对VcLON2转化本氏烟生长的影响 | 第34-36页 |
| 2.7.1 相对含水量的测定 | 第34页 |
| 2.7.2 叶绿素含量的测定 | 第34-35页 |
| 2.7.3 MDA含量的测定 | 第35页 |
| 2.7.4 羰基化蛋白含量的测定 | 第35页 |
| 2.7.5 叶片H_2O_2原位染色 | 第35页 |
| 2.7.6 抗氧化酶APX、CAT和Cu/Zn SOD的活性的测定 | 第35页 |
| 2.7.7 抗逆相关基因的表达情况 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-43页 |
| 3.1 蓝莓VcLON2-pSH737超表达载体的构建 | 第36页 |
| 3.2 VcLON2转化本氏烟抗性植株的检测 | 第36-37页 |
| 3.3 叶盘法检测VcLON2转化本氏烟对逆境的抗性 | 第37-38页 |
| 3.4 逆境胁迫对VcLON2转化本氏烟生长的影响 | 第38-43页 |
| 3.4.1 对本氏烟表型生长情况的影响 | 第38-40页 |
| 3.4.2 对本氏烟生理生化的影响 | 第40-42页 |
| 3.4.3 对本氏烟抗氧化酶基因表达量及活性的影响 | 第42-43页 |
| 3.4.4 对本氏烟蛋白修复酶基因表达的影响 | 第43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 通过沉默本氏烟研究NbLON2基因功能 | 第45-55页 |
| 1 前言 | 第45页 |
| 2 材料与方法 | 第45-48页 |
| 2.1 植物材料 | 第45页 |
| 2.2 载体和菌株 | 第45页 |
| 2.3 试剂 | 第45-46页 |
| 2.4 烟草NbLON2基因RNAi载体的构建 | 第46-47页 |
| 2.4.1 引物设计 | 第46页 |
| 2.4.2 RNAi载体构建 | 第46-47页 |
| 2.5 农杆菌介导法遗传转化本氏烟 | 第47页 |
| 2.6 逆境胁迫对NbLON2 RNAi本氏烟生长的影响 | 第47-48页 |
| 2.6.1 相对含水量的测定 | 第47页 |
| 2.6.2 叶绿素含量的测定 | 第47页 |
| 2.6.3 MDA含量的测定 | 第47页 |
| 2.6.4 羰基化蛋白含量的测定 | 第47页 |
| 2.6.5 叶片H_2O_2原位染色 | 第47-48页 |
| 2.6.6 抗氧化酶CAT表达量及其活性的测定 | 第48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-53页 |
| 3.1 NbLON2基因RNAi载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.2 NbLON2 RNAi本氏烟抗性植株的获得 | 第49页 |
| 3.3 NbLON2 RNAi本氏烟抗性植株的抗逆能力分析 | 第49-53页 |
| 3.3.1 对本氏烟表型生长情况的影响 | 第49-51页 |
| 3.3.2 对本氏烟生理生化的影响 | 第51-53页 |
| 3.3.3 对CAT表达量及其酶活的影响 | 第53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 第五章 蓝莓VcLON2蛋白酶的原核表达及纯化 | 第55-62页 |
| 1 引言 | 第55页 |
| 2 材料与方法 | 第55-58页 |
| 2.1 载体和菌株 | 第55-56页 |
| 2.2 试剂 | 第56页 |
| 2.3 构建原核表达载体VcLON2-pET30a(+) | 第56页 |
| 2.4 表达菌株的筛选 | 第56-57页 |
| 2.5 IPTG浓度梯度的筛选 | 第57页 |
| 2.6 VcLON2融合蛋白的纯化 | 第57-58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-61页 |
| 3.1 重组原核表达载体VcLON2-pET30a(+)的构建 | 第58页 |
| 3.2 原核表达菌株的筛选 | 第58-59页 |
| 3.3 原核表达IPTG浓度的的筛选 | 第59页 |
| 3.4 VcLON2融合蛋白的纯化 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-62页 |
| 第六章 结论与展望 | 第62-65页 |
| 1 研究结论 | 第62-64页 |
| 1.1 LON2蛋白酶对抗逆的作用 | 第62页 |
| 1.2 LON2在过氧化物酶体H_2O_2的稳态中可能有重要作用 | 第62-63页 |
| 1.3 LON2蛋白酶可以调控氧化蛋白水平 | 第63页 |
| 1.4 LON2蛋白酶对抗氧化酶酶活的调控作用 | 第63-64页 |
| 2 研究展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第73-75页 |
