| 致谢 | 第5-9页 |
| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 缩略词简表 (Abbreviations) | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-35页 |
| 前言 | 第16页 |
| 1.1 谷氨酰胺代谢 | 第16-20页 |
| 1.1.1 正常组织中的谷氨酰胺代谢 | 第17-18页 |
| 1.1.2 肿瘤细胞谷氨酰胺代谢 | 第18-19页 |
| 1.1.3 谷氨酰胺转运体 | 第19-20页 |
| 1.2 靶向谷氨酰胺酶诱导细胞凋亡 | 第20-21页 |
| 1.2.1 谷氨酰胺剥夺 | 第20-21页 |
| 1.2.2 限制谷氨酰胺的摄取 | 第21页 |
| 1.3 谷氨酰胺酶 | 第21-25页 |
| 1.3.1 人源谷氨酰胺酶 | 第21-22页 |
| 1.3.2 谷氨酰胺酶调控 | 第22-23页 |
| 1.3.3 谷氨酰胺酶晶体结构 | 第23-24页 |
| 1.3.4 谷氨酸结合口袋 | 第24-25页 |
| 1.4 谷氨酰胺酶活性测试方法 | 第25-26页 |
| 1.4.1 纳氏试剂比色法 | 第25页 |
| 1.4.2 邻苯二甲醛显现法 | 第25-26页 |
| 1.4.3 NAD（P）H-NAD（P）法 | 第26页 |
| 1.4.4 谷氨酸氧化酶偶联法 | 第26页 |
| 1.5 谷氨酰胺酶抑制剂 | 第26-35页 |
| 1.5.1 阿西维辛 | 第26-27页 |
| 1.5.2 DON | 第27-29页 |
| 1.5.3 小分子 968 | 第29-30页 |
| 1.5.4 BPTES | 第30-32页 |
| 1.5.5 CB-839 | 第32-33页 |
| 1.5.6 Ebselen | 第33-35页 |
| 第二章 人源谷氨酰胺酶基因工程菌的构建及其蛋白的表达纯化 | 第35-53页 |
| 2.1 概述 | 第35页 |
| 2.2 实验仪器与材料 | 第35-39页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第35-36页 |
| 2.2.2 菌种和质粒 | 第36页 |
| 2.2.3 试剂 | 第36-38页 |
| 2.2.4 溶液配制 | 第38-39页 |
| 2.3 实验方法 | 第39-44页 |
| 2.3.1 质粒载体的选择 | 第39-40页 |
| 2.3.2 基因工程菌的构建 | 第40-42页 |
| 2.3.2.1 TA克隆 | 第40-41页 |
| 2.3.2.2 重组质粒构建 | 第41-42页 |
| 2.3.2.3 克隆载体构建 | 第42页 |
| 2.3.3 重组蛋白诱导表达及分离纯化 | 第42-43页 |
| 2.3.3.1 表达载体构建 | 第42页 |
| 2.3.3.2 重组蛋白表达 | 第42页 |
| 2.3.3.3 重组蛋白分离纯化 | 第42-43页 |
| 2.3.3.4 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第43页 |
| 2.3.4 分子互作 | 第43-44页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第44-52页 |
| 2.4.1 TA克隆 | 第44-47页 |
| 2.4.2 酶切鉴定 | 第47-48页 |
| 2.4.3 测序鉴定 | 第48-50页 |
| 2.4.4 重组蛋白诱导表达及分离纯化 | 第50-51页 |
| 2.4.5 分子互作 | 第51-52页 |
| 2.5 小结 | 第52-53页 |
| 第三章 谷氨酸脱氢酶蛋白表达及活性测试方法的建立 | 第53-71页 |
| 3.1 概述 | 第53页 |
| 3.2 实验仪器与材料 | 第53-56页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第53-54页 |
| 3.2.2 菌种和质粒 | 第54页 |
| 3.2.3 试剂 | 第54-55页 |
| 3.2.4 溶液配制 | 第55-56页 |
| 3.3 实验方法 | 第56-59页 |
| 3.3.1 E.coli cDNA提取 | 第56页 |
| 3.3.2 E.coli谷氨酸脱氢酶克隆与表达 | 第56-57页 |
| 3.3.3 谷氨酸脱氢酶活性方法的建立 | 第57-59页 |
| 3.3.3.1 活性检测试剂的筛选 | 第57-58页 |
| 3.3.3.2 检测条件的优化 | 第58页 |
| 3.3.3.3 检测方法的建立 | 第58-59页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第59-69页 |
| 3.4.1 E.coli谷氨酸脱氢酶克隆与表达 | 第59-60页 |
| 3.4.2 四氮唑盐及其光谱表征 | 第60-61页 |
| 3.4.3 新型检测试剂的优势 | 第61-67页 |
| 3.4.3.1 NAD（P）H实验 | 第61-64页 |
| 3.4.3.2 干扰性评价 | 第64-66页 |
| 3.4.3.3 试剂稳定性 | 第66-67页 |
| 3.4.4 检测方法的建立 | 第67-69页 |
| 3.4.4.1 谷氨酸脱氢酶活性的测定 | 第67-69页 |
| 3.5 小结 | 第69-71页 |
| 第四章 谷氨酰胺酶活性测试方法的建立 | 第71-77页 |
| 4.1 概述 | 第71页 |
| 4.2 实验仪器与材料 | 第71-73页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第71页 |
| 4.2.3 试剂 | 第71-72页 |
| 4.2.4 溶液配制 | 第72-73页 |
| 4.3 实验方法 | 第73页 |
| 4.3.1 谷氨酰胺条件的优化 | 第73页 |
| 4.3.2 hKGA活性测定 | 第73页 |
| 4.3.3 方法重现性 | 第73页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第73-76页 |
| 4.4.1 谷氨酰胺条件的优化 | 第74页 |
| 4.4.2 酶活性检测方法 | 第74-75页 |
| 4.4.3 方法重现性 | 第75-76页 |
| 4.5 小结 | 第76-77页 |
| 第五章 谷氨酰胺酶活性测试方法的应用 | 第77-86页 |
| 5.1 概述 | 第77页 |
| 5.2 实验仪器与材料 | 第77-78页 |
| 5.2.1 实验仪器 | 第77页 |
| 5.2.2 试剂及试剂盒 | 第77-78页 |
| 5.2.3 溶液配制 | 第78页 |
| 5.3 实验方法 | 第78-80页 |
| 5.3.1 纸层析鉴定 | 第78-79页 |
| 5.3.2 GO抑制实验 | 第79页 |
| 5.3.3 HPLC | 第79-80页 |
| 5.3.4 HRP抑制实验 | 第80页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第80-84页 |
| 5.4.1 纸层析实验 | 第80-81页 |
| 5.4.2 依布硒啉抑制谷氨酸脱氢酶而非谷氨酰胺酶 | 第81-84页 |
| 5.5 小结 | 第84-86页 |
| 第六章 谷氨酰胺酶抑制剂的筛选 | 第86-94页 |
| 6.1 概述 | 第86页 |
| 6.2 实验仪器与材料 | 第86-87页 |
| 6.2.1 实验仪器及试剂 | 第86页 |
| 6.2.2 溶液配制 | 第86-87页 |
| 6.3 实验方法 | 第87-88页 |
| 6.3.1 谷氨酰胺酶抑制剂筛选 | 第87页 |
| 6.3.2 谷氨酸脱氢酶抑制剂筛选 | 第87-88页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第88-93页 |
| 6.4.1 谷氨酰胺酶抑制剂筛选 | 第88-90页 |
| 6.4.2 谷氨酸脱氢酶抑制剂筛选 | 第90-93页 |
| 6.5 小结 | 第93-94页 |
| 第七章 全文总结、创新点与展望 | 第94-97页 |
| 7.1 总结 | 第94-96页 |
| 7.2 创新点 | 第96页 |
| 7.3 展望 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-113页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文和专利 | 第113页 |