| 摘要 | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-20页 |
| 1 CRISPR/Cas9系统 | 第10-13页 |
| 1.1 CRISPR/Cas9系统基本结构 | 第10-11页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9系统工作原理 | 第11-12页 |
| 1.3 基因编辑技术在水产生物中的应用 | 第12-13页 |
| 2 tyrp1b基因简介 | 第13-14页 |
| 3 chmp7基因简介 | 第14-16页 |
| 4 kank3基因简介 | 第16-17页 |
| 5 基因测序和T7EI酶切的原理简介 | 第17-18页 |
| 6 本研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 Cas9系统介导tyrp1b基因突变 | 第20-31页 |
| 1 材料与方法 | 第20-26页 |
| 1.1 试验动物 | 第20页 |
| 1.2 仪器和试剂 | 第20页 |
| 1.3 Cas9靶位点的设计 | 第20-22页 |
| 1.3.1 Cas9靶位点的选择 | 第20-21页 |
| 1.3.2 Cas9靶位点的确认 | 第21-22页 |
| 1.4 构建gRNA体外转录载体 | 第22页 |
| 1.5 制备Cas9 mRNA和gRNA | 第22-24页 |
| 1.5.1 制备Cas9 mRNA | 第22-23页 |
| 1.5.2 制备gRNA | 第23-24页 |
| 1.6 制备F0斑马鱼与靶点突变效率检测 | 第24-26页 |
| 2 结果 | 第26-29页 |
| 2.1 tyrp1b基因巢式PCR结果 | 第26页 |
| 2.2 tyrp1b基因F0代PCR片段测序结果 | 第26-27页 |
| 2.3 tyrp1b基因b1组T7E1酶切结果 | 第27-28页 |
| 2.4 tyrp1b基因b1组TA克隆结果 | 第28-29页 |
| 2.5 tyrp1b基因突变率及畸形、死亡率结果 | 第29页 |
| 3 讨论 | 第29-30页 |
| 4 小结 | 第30-31页 |
| 第三章 Cas9系统介导chmp7基因突变 | 第31-38页 |
| 1 材料与方法 | 第31-32页 |
| 1.1 试验动物 | 第31页 |
| 1.2 Cas9系统体外构建 | 第31-32页 |
| 1.3 制备F0斑马鱼与靶点突变效率检测 | 第32页 |
| 1.4 检测F0的germLine transmission | 第32页 |
| 1.5 筛选携带靶位点突变的F1成鱼 | 第32页 |
| 2 结果 | 第32-37页 |
| 2.1 chmp7基因巢式PCR结果 | 第32-33页 |
| 2.2 chmp7基因F0代PCR片段测序结果 | 第33-34页 |
| 2.3 chmp7基因t1组T7E1酶切结果 | 第34-35页 |
| 2.4 chmp7基因F1代PCR片段测序结果 | 第35-36页 |
| 2.5 chmp7基因突变率及畸形、死亡率结果 | 第36-37页 |
| 3 讨论 | 第37页 |
| 4 小结 | 第37-38页 |
| 第四章 Cas9系统介导kank3基因突变 | 第38-45页 |
| 1 材料与方法 | 第38-39页 |
| 1.1 试验动物 | 第38页 |
| 1.2 Cas9系统体外构建 | 第38-39页 |
| 1.3 制备F0斑马鱼与靶点突变效率检测 | 第39页 |
| 1.4 检测F0和F1代的靶点突变效率 | 第39页 |
| 2 结果 | 第39-44页 |
| 2.1 kank3基因巢式PCR结果 | 第39页 |
| 2.2 kank3基因F0代PCR片段测序结果 | 第39-40页 |
| 2.3 kank3基因c3组T7E1酶切结果 | 第40-41页 |
| 2.4 kank3基因F1代测序结果 | 第41-42页 |
| 2.5 kank3基因c3组TA克隆结果 | 第42-43页 |
| 2.6 kank3基因突变率及畸形、死亡率结果 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44页 |
| 4 小结 | 第44-45页 |
| 全文讨论 | 第45-47页 |
| 全文结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| Abstract | 第54页 |
| 附录1 tyrp1b基因序列 | 第56-57页 |
| 附录2 chmp7基因序列 | 第57-59页 |
| 附录3 kank3基因序列 | 第59-61页 |
| 附录4 发表文章 | 第61-62页 |
| 附录5 显微注射仪和斑马鱼养殖系统简略图 | 第62-64页 |
| 致谢 | 第64页 |