| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-18页 |
| ·家蝇简介 | 第10页 |
| ·家蝇的免疫系统 | 第10-11页 |
| ·细胞免疫 | 第10-11页 |
| ·体液免疫 | 第11页 |
| ·酚氧化酶及酚氧化酶原激活系统简介 | 第11-13页 |
| ·酚氧化酶原激活系统的组成 | 第12-13页 |
| ·酚氧化酶原激活系统作用原理 | 第13页 |
| ·酚氧化酶及酶原的定位 | 第13-14页 |
| ·酚氧化酶原的结构 | 第14页 |
| ·酚氧化酶原的激活 | 第14-15页 |
| ·酚氧化酶的功能 | 第15-16页 |
| ·酚氧化酶研究前景 | 第16-18页 |
| 第二章 实验材料与仪器 | 第18-22页 |
| ·实验材料 | 第18页 |
| ·试剂和仪器 | 第18-19页 |
| ·试剂 | 第18-19页 |
| ·仪器 | 第19页 |
| ·主要溶液配方 | 第19-22页 |
| 第三章 实验方法 | 第22-42页 |
| ·家蝇MdproPO1氨基酸序列比对 | 第22页 |
| ·构建表达载体mdproPO1/pET-30a | 第22-28页 |
| ·mdproPO1基因ORF的PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·PCR产物纯化 | 第23-24页 |
| ·mdproPO1基因酶切与pET-30a连接 | 第24-25页 |
| ·DH5α 感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·转化 | 第25-26页 |
| ·阳性菌的筛选 | 第26页 |
| ·表达质粒mdproPO1/pET-30a的提取与验证 | 第26-28页 |
| ·MdproPO1重组蛋白的表达 | 第28-29页 |
| ·mdproPO1/pET-30a/Rosetta表达菌株的构建与筛选 | 第28页 |
| ·表达菌株的试表达 | 第28-29页 |
| ·诱导条件的优化 | 第29页 |
| ·表达菌株的大规模表达 | 第29页 |
| ·MdproPO1的多克隆抗体制备 | 第29-31页 |
| ·切胶制备抗体 | 第29-30页 |
| ·Western blot | 第30-31页 |
| ·MdproPO1的抗体封闭 | 第31-32页 |
| ·酶抗体封闭后的家蝇幼虫的MdproPO1酶活性检测 | 第31-32页 |
| ·抗体封闭后家蝇幼虫的死亡率检测 | 第32页 |
| ·mdproPO1基因的RNAi | 第32-38页 |
| ·mdproPO1基因cDNA片段扩增 | 第32-33页 |
| ·PCR产物纯化 | 第33-34页 |
| ·mdproPO1基因的dsRNA合成 | 第34页 |
| ·消化 | 第34页 |
| ·dsRNA纯化 | 第34-35页 |
| ·GFP基因cDNA扩增与dsRNA合成 | 第35页 |
| ·RNAi干扰实验 | 第35-38页 |
| ·RNAi干扰的家蝇幼虫mdproPO1基因的qRT-PCR检测 | 第35-37页 |
| ·RNAi干扰的家蝇幼虫MdproPO1酶活性检测 | 第37-38页 |
| ·RNAi干扰的家蝇幼虫死亡率检测 | 第38页 |
| ·MdproPO1可溶性蛋白的制备探索 | 第38-42页 |
| ·MdproPO1包涵体的变性与复性 | 第38页 |
| ·TCA法浓缩纯目的蛋白 | 第38-39页 |
| ·浓缩样品过HIS柱纯化 | 第39页 |
| ·Western blot检测复性的MdproPO1蛋白 | 第39页 |
| ·复性MdproPO1蛋白的酶活性检测探索 | 第39页 |
| ·复性的MdproPO1蛋白的浓度检测 | 第39-42页 |
| 第四章 结果与分析 | 第42-58页 |
| ·家蝇MdproPO1氨基酸序列比对 | 第42-43页 |
| ·构建的表达载体mdproPO1/pET-30a | 第43-44页 |
| ·MdproPO1重组蛋白的表达结果 | 第44-47页 |
| ·MdproPO1重组蛋白的试表达结果 | 第44-45页 |
| ·诱导条件优化结果 | 第45-47页 |
| ·大规模表达结果 | 第47页 |
| ·MdproPO1的多克隆抗体的制备结果 | 第47-48页 |
| ·MdproPO1抗体封闭实验结果 | 第48-50页 |
| ·抗体封闭后的家蝇幼虫的MdproPO1酶活性检测结果 | 第48-49页 |
| ·抗体封闭后的家蝇幼虫死亡率检测结果 | 第49-50页 |
| ·mdproPO1基因的RNAi实验结果 | 第50-52页 |
| ·RNAi干扰的家蝇幼虫mdproPO1基因的qRT-PCR检测结果 | 第50-51页 |
| ·RNAi干扰的家蝇幼虫MdproPO1酶活性检测结果 | 第51页 |
| ·RNAi干扰的家蝇幼虫死亡率检测结果 | 第51-52页 |
| ·MdproPO1可溶性重组蛋白的制备结果 | 第52-58页 |
| ·MdproPO1包涵体的变性与复性结果 | 第52-53页 |
| ·Western blot检测复性的MdproPO1蛋白结果 | 第53-54页 |
| ·复性的MdproPO1蛋白的酶活检测结果 | 第54-55页 |
| ·复性的MdproPO1蛋白的浓度检测结果 | 第55-58页 |
| 第五章 结论与展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
