| 中文摘要 | 第1-19页 |
| ABSTRACT | 第19-24页 |
| 符号说明 | 第24-27页 |
| 第一章 绪论 | 第27-51页 |
| ·大肠杆菌O157：H7 | 第28-37页 |
| ·概述 | 第28-29页 |
| ·志贺样毒素 | 第29-30页 |
| ·细菌表面多糖 | 第30-34页 |
| ·概述 | 第30页 |
| ·脂多糖 | 第30-31页 |
| ·O-多糖的结构和功能 | 第31-32页 |
| ·O-多糖的合成 | 第32-33页 |
| ·依赖于Wzy的O-多糖合成途径 | 第33-34页 |
| ·麦芽糖结合蛋白 | 第34-35页 |
| ·EHEC疫苗 | 第35页 |
| ·大肠杆菌O157：H7疫苗 | 第35-37页 |
| ·糖缀合物疫苗 | 第37-48页 |
| ·TI抗原和TD抗原 | 第37页 |
| ·多糖疫苗 | 第37-38页 |
| ·糖缀合物疫苗 | 第38页 |
| ·糖缀合物疫苗激活T细胞的机制 | 第38-40页 |
| ·影响糖缀合物疫苗免疫原性的因素 | 第40-41页 |
| ·多糖糖链的长度 | 第40页 |
| ·多糖：载体蛋白比例 | 第40页 |
| ·载体蛋白的选择 | 第40-41页 |
| ·交联方法 | 第41页 |
| ·载体蛋白对糖缀合物疫苗抗多糖抗体的促进和抑制作用 | 第41-42页 |
| ·糖缀合物疫苗的合成 | 第42-48页 |
| ·糖缀合物疫苗的化学法合成 | 第42-43页 |
| ·糖缀合物疫苗的生物法合成 | 第43-46页 |
| ·影响生物法合成糖缀合物疫苗得率的因素 | 第46-48页 |
| ·适应性免疫应答 | 第48-51页 |
| ·概述 | 第48页 |
| ·细胞免疫应答 | 第48-49页 |
| ·体液免疫应答 | 第49-50页 |
| ·补体应答 | 第50页 |
| ·Th1和Th2型免疫应答 | 第50-51页 |
| 第二章 生物法合成糖缀合物疫苗 | 第51-83页 |
| ·引言 | 第51-52页 |
| ·实验材料 | 第52-56页 |
| ·菌株和质粒 | 第52-53页 |
| ·试剂和耗材 | 第53-54页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第54-56页 |
| ·主要仪器 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-68页 |
| ·E.coli N-糖基化系统的建立 | 第56-64页 |
| ·宿主菌的选择 | 第56-57页 |
| ·糖基转移酶WaaL的敲除 | 第57-59页 |
| ·糖基转移酶PglB表达质粒的构建 | 第59-60页 |
| ·载体蛋白MBP、CRM_(197)、AcrA表达质粒的构建 | 第60-62页 |
| ·E.coli O157：H7 O-PS表达质粒的构建 | 第62-63页 |
| ·重组质粒p-O-PS表达活性的检测 | 第63-64页 |
| ·p-MBP/p-CRM/p-AcrA、p-PglB转化E.coli W3110/Δwaal/p-O-PS | 第64页 |
| ·糖缀合物的诱导表达纯化 | 第64-65页 |
| ·糖缀合物的诱导表达 | 第64-65页 |
| ·糖缀合物的纯化 | 第65页 |
| ·糖缀合物的检测 | 第65-68页 |
| ·考马斯亮蓝染色及western blot检测 | 第65-66页 |
| ·MALDI-TOF检测 | 第66页 |
| ·单糖组成分析 | 第66-67页 |
| ·蛋白浓度检测 | 第67页 |
| ·总糖浓度检测 | 第67-68页 |
| ·结果与讨论 | 第68-80页 |
| ·E.coli N-糖基化系统的建立 | 第68-72页 |
| ·糖基转移酶WaaL的敲除 | 第68-70页 |
| ·重组质粒p-MBP、p-CRM、p-AcrA、p-PglB的获得 | 第70-71页 |
| ·重组质粒p-O-PS的获得 | 第71-72页 |
| ·糖缀合物的诱导表达纯化和检测 | 第72-80页 |
| ·糖缀合物的诱导表达纯化 | 第72页 |
| ·糖缀合物的考马斯亮蓝染色检测 | 第72-73页 |
| ·糖缀合物的western blot检测 | 第73-75页 |
| ·糖缀合物的单糖组成分析 | 第75-76页 |
| ·糖缀合物的MALDI-TOF检测 | 第76-79页 |
| ·糖缀合物的定量测定 | 第79-80页 |
| ·本章小结 | 第80-83页 |
| 第三章 糖缀合物疫苗O-PS-MBP的免疫学评价 | 第83-101页 |
| ·引言 | 第83页 |
| ·实验材料 | 第83-85页 |
| ·试剂和耗材 | 第83-84页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第84页 |
| ·主要仪器 | 第84-85页 |
| ·实验方法 | 第85-90页 |
| ·小鼠免疫 | 第85-86页 |
| ·O-PS-MBP免疫小鼠实验 | 第85页 |
| ·采集小鼠血清 | 第85页 |
| ·采集小鼠粪便 | 第85-86页 |
| ·收集小鼠脾脏淋巴细胞 | 第86页 |
| ·E.coli O157：H7 LPS的大量提取 | 第86-87页 |
| ·抗体滴度检测 | 第87-88页 |
| ·抗E.coli O157：H7多糖抗体滴度检测 | 第87-88页 |
| ·抗MBP抗体滴度检测 | 第88页 |
| ·细胞因子检测 | 第88-89页 |
| ·血清细胞因子检测 | 第88页 |
| ·ELISPOT检测分泌细胞因子的淋巴细胞 | 第88-89页 |
| ·淋巴细胞亚型检测 | 第89-90页 |
| ·补体介导的血清杀菌实验 | 第90页 |
| ·结果和讨论 | 第90-98页 |
| ·O-PS-MBP激活体液免疫 | 第90-94页 |
| ·O-PS-MBP刺激脾脏淋巴B细胞增殖 | 第90-91页 |
| ·O-PS-MBP刺激产生抗E.coli O157：H7多糖的抗体 | 第91-92页 |
| ·补体介导的O-PS-MBP免疫血清杀菌实验 | 第92-93页 |
| ·O-PS-MBP刺激产生抗MBP的抗体 | 第93-94页 |
| ·O-PS-MBP激活细胞免疫 | 第94-97页 |
| ·O-PS-MBP刺激脾脏淋巴CD4+和CD8+T细胞增殖 | 第94-95页 |
| ·O-PS-MBP激活机体偏向Th1型免疫应答 | 第95-97页 |
| ·载体蛋白MBP促进O-PS-MBP偏向Th1型免疫应答 | 第97-98页 |
| ·本章小结 | 第98-101页 |
| 第四章 载体蛋白及其不同位置多肽对糖缀合物疫苗抗多糖IgG滴度和亚型的影响 | 第101-115页 |
| ·引言 | 第101页 |
| ·实验材料 | 第101-102页 |
| ·试剂和耗材 | 第101页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第101页 |
| ·主要仪器 | 第101-102页 |
| ·实验方法 | 第102-104页 |
| ·多肽合成 | 第102页 |
| ·小鼠免疫 | 第102-104页 |
| ·多肽免疫小鼠实验 | 第102-103页 |
| ·不同载体蛋白的糖缀合物疫苗免疫小鼠实验 | 第103-104页 |
| ·抗体滴度检测 | 第104页 |
| ·抗E.coli O157：H7多糖抗体滴度的检测 | 第104页 |
| ·抗MBP、CRM_(197)、AcrA抗体滴度检测 | 第104页 |
| ·抗多肽抗体滴度的检测 | 第104页 |
| ·结果和讨论 | 第104-112页 |
| ·载体蛋白及其不同位置多肽对糖缀合物疫苗抗多糖IgG滴度的影响 | 第104-108页 |
| ·载体蛋白不同的糖缀合物疫苗产生的抗多糖IgG滴度不同 | 第104-105页 |
| ·MBP不同位置多肽对O-PS-MBP抗多糖IgG滴度的影响 | 第105-108页 |
| ·载体蛋白及其不同位置多肽对糖缀合物疫苗抗多糖IgG亚型的影响 | 第108-111页 |
| ·载体蛋白不同的糖缀合物疫苗产生的抗多糖IgG亚型分布不同 | 第108-109页 |
| ·抗多糖IgG亚型和抗载体蛋白IgG亚型的关系 | 第109-110页 |
| ·抗多糖IgG亚型和抗MBP不同位置多肽IgG亚型的关系 | 第110-111页 |
| ·糖链对糖缀合物疫苗抗载体蛋白IgG滴度和亚型的影响 | 第111-112页 |
| ·本章小结 | 第112-115页 |
| 全文总结 | 第115-117页 |
| 附录和附图 | 第117-121页 |
| 载体蛋白MBP氨基酸序列 | 第117页 |
| 载体蛋白CRM_(197)氨基酸序列 | 第117-118页 |
| 载体蛋白AcrA氨基酸序列 | 第118页 |
| 多肽MS鉴定 | 第118-121页 |
| 参考文献 | 第121-139页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第139-141页 |
| 致谢 | 第141-142页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第142页 |
