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苹果HMGR基因家族启动子的克隆及功能分析

中文摘要第1-13页
Abstract第13-17页
1 前言第17-40页
   ·植物启动子的基本结构第17-19页
     ·转录起始位点第17-18页
     ·TATA-box第18页
     ·CAAT-box第18页
     ·GC-box第18页
     ·特殊的上游元件第18-19页
   ·组成型启动子第19页
   ·诱导型启动子第19-25页
     ·植物激素诱导型启动子第20-24页
       ·生长素诱导型启动子第20页
       ·赤霉素诱导型启动子第20-21页
       ·脱落酸诱导型启动子第21-22页
       ·乙烯诱导型启动子第22页
       ·水杨酸诱导型启动子第22-23页
       ·茉莉酸诱导型启动子第23-24页
     ·光诱导型启动子第24页
     ·伤诱导型启动子第24-25页
     ·高温诱导型启动子第25页
   ·组织特异性启动子第25-29页
     ·根特异性启动子第25-26页
     ·叶片特异性启动子第26-27页
     ·花特异性启动子第27-28页
       ·花药特异性表达启动子第27页
       ·花粉特异性表达启动子第27-28页
     ·果实特异性启动子第28页
     ·种子特异性启动子第28-29页
   ·启动子的分离技术第29-31页
   ·启动子的研究方法第31-32页
     ·顺式作用元件的预测分析第31页
     ·瞬时表达分析第31页
     ·缺失分析第31-32页
     ·突变分析第32页
   ·植物萜类物质第32-38页
     ·植物萜类物质的作用第32页
     ·植物萜类的代谢途径第32-34页
       ·MVA途径第33页
       ·MEP途径第33-34页
     ·萜类代谢途径中的相关酶对发育的影响第34-36页
       ·乙酰辅酶A酞基转移酶(AACT)第34页
       ·3-烃基3甲基戊二酰辅酶A合成酶(HMGS)第34页
       ·异戊烯基焦磷酸异构酶(IPI)第34-35页
       ·法呢基焦磷酸合酶(FPS)第35页
       ·香叶基香叶基二磷酸合酶(GGPPS)第35页
       ·脱氧木酮糖磷酸盐还原异构酶(DXR)第35-36页
       ·4-磷酸胞苷2甲基赤藓糖激酶(CMK)第36页
     ·3-烃基3甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)的研究进展第36-38页
   ·本研究的目的和意义第38-40页
2 材料与方法第40-57页
   ·实验材料第40-42页
     ·植物材料第40页
     ·菌株与质粒第40页
     ·酶与各种生化试剂第40页
     ·实验用的引物和寡核苷酸第40-42页
   ·实验方法第42-57页
     ·总RNA的提取第42-43页
     ·RNA反转录第43-44页
     ·实时荧光定量PCR第44页
     ·苹果基因组总DNA的提取第44页
     ·HMGR启动子的克隆第44-45页
     ·DNA产物纯化回收第45页
     ·连接反应第45-46页
     ·重组载体转化大肠杆菌及克隆的筛选第46页
     ·质粒提取试剂盒提取质粒DNA第46-47页
     ·酶切鉴定第47-48页
     ·农杆菌感受态细胞的制备第48页
     ·冻融法转化农杆菌第48页
     ·5′RACE法确定苹果HMGR基因的转录起始位点第48-50页
     ·苹果HMGR启动子的生物信息学分析第50页
     ·MdHMGR2启动子-GUS重组表达载体的构建第50页
     ·花浸法转化拟南芥第50-51页
     ·GUS组织化学染色第51页
     ·GUS荧光定量分析第51-53页
       ·试剂的配制第51-52页
       ·蛋白标准曲线及蛋白标准曲线的制作第52页
       ·GUS荧光定量检测第52-53页
     ·苹果及转基因拟南芥的激素处理第53页
     ·植物核蛋白提取第53页
     ·化学发光法凝胶阻滞实验(EMSA)第53-56页
       ·聚丙烯酰胺凝胶电泳第54页
       ·EMSA结合反应第54-55页
       ·电泳第55页
       ·转膜第55页
       ·化学发光法检测生物素标记的探针第55-56页
     ·拟南芥瞬时表达第56-57页
3 结果与分析第57-92页
   ·苹果HMGR基因家族的表达模式分析第57-63页
     ·苹果HMGR基因的组织表达分析第57-59页
     ·苹果HMGR基因的激素诱导表达分析第59-63页
   ·MdHMGR2启动子的功能分析第63-79页
     ·MdHMGR2启动子的克隆第63-64页
     ·MdHMGR2基因转录起始位点的确定第64-65页
     ·MdHMGR2启动子的生物信息学分析第65-67页
     ·MdHMGR2启动子-GUS重组表达载体的构建第67-70页
     ·含有MdHMGR2启动子系列片段的转基因拟南芥植株的获得与鉴定第70-71页
     ·MdHMGR2全长启动子在转基因拟南芥中的GUS表达模式分析第71-72页
     ·MdHMGR2启动子系列缺失片段在转基因拟南芥中的GUS表达模式分析第72-76页
     ·含有MdHMGR2启动子的转基因拟南芥的GUS诱导表达分析第76-77页
     ·EMSA分析第77-79页
   ·MdHMGR3及MdHMGR3-like启动子的研究进展第79-92页
     ·MdHMGR3-like基因的克隆及序列分析第79-81页
     ·MdHMGR3-like基因的组织表达分析第81-82页
     ·MdHMGR3-like基因的激素诱导表达分析第82-83页
     ·MdHMGR3及MdHMGR3-like启动子的克隆第83-84页
     ·MdHMGR3及MdHMGR3-like基因转录起始位点的确定第84页
     ·MdHMGR3及MdHMGR3-like启动子生物信息学分析第84-85页
     ·MdHMGR3及MdHMGR3-like启动子-GUS重组表达载体的构建第85-87页
     ·MdHMGR3及MdHMGR3-like启动子全长在转基因拟南芥中的表达模式分析第87-89页
     ·MdHMGR3-like启动子系列片段在拟南芥中的瞬时表达分析第89-90页
     ·苹果HMGR基因家族启动子的序列分析第90-92页
4 讨论第92-95页
5 结论第95-96页
参考文献第96-105页
致谢第105-106页
攻读学位期间发表论文情况第106页

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