| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1 猪流行性腹泻病毒（PEDV）研究进展 | 第12-16页 |
| ·PEDV 的分类地位及形态特征 | 第12页 |
| ·PEDV 的分类地位 | 第12页 |
| ·PEDV 的形态特征 | 第12页 |
| ·PEDV 的理化特征 | 第12-13页 |
| ·PEDV 的培养特性 | 第13页 |
| ·PEDV 的病原性 | 第13-14页 |
| ·PEDV 遗传分子生物学特性 | 第14-16页 |
| ·基因组结构 | 第14页 |
| ·非结构基因 | 第14-15页 |
| ·结构基因及其产物 | 第15-16页 |
| 2 PEDV 诊断方法 | 第16-18页 |
| ·免疫电镜法 | 第16页 |
| ·免疫荧光法 | 第16页 |
| ·病毒中和法 | 第16-17页 |
| ·RT–PCR 法 | 第17页 |
| ·ELISA 法 | 第17-18页 |
| 3 PEDV S 蛋白研究进展 | 第18页 |
| 4 本试验的目的和意义 | 第18-19页 |
| 5 研究内容与试验流程 | 第19-21页 |
| ·研究内容 | 第19-20页 |
| ·试验流程 | 第20-21页 |
| 第二章 猪流行性腹泻病毒截短 S1 基因的原核表达 | 第21-43页 |
| 1 材料 | 第21-24页 |
| ·试验材料 | 第21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21页 |
| ·试剂、培养基的配制 | 第21-22页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用试剂的配制 | 第22页 |
| ·SDS-PAGE 试剂配制 | 第22-23页 |
| ·蛋白纯化试剂的配制 | 第23页 |
| ·蛋白透析复性液的配制 | 第23-24页 |
| ·透析袋处理液 | 第23页 |
| ·透析复性液 | 第23-24页 |
| ·Western Blot 试剂配制 | 第24页 |
| 2 试验方法 | 第24-33页 |
| ·重组质粒 PMD-S1 的构建 | 第24-28页 |
| ·引物的设计 | 第24-25页 |
| ·病毒 RNA 的提取 | 第25页 |
| ·cDNA 的合成 | 第25页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第25-26页 |
| ·目的基因的回收纯化 | 第26页 |
| ·目的基因的 T-A 克隆 | 第26页 |
| ·连接产物的转化 | 第26-27页 |
| ·重组菌的筛选和鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组表达质粒 pET-S1 的构建 | 第28-29页 |
| ·带有粘性末端的目的基因及原核表达载体的制备 | 第28页 |
| ·表达载体与目的基因的连接 | 第28-29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29页 |
| ·重组表达菌的筛选和鉴定 | 第29页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第29-30页 |
| ·表达条件的优化 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白的大量表达 | 第30页 |
| ·重组蛋白表达形式的鉴定 | 第30页 |
| ·重组蛋白纯化、复性 | 第30-32页 |
| ·咪唑浓度优化及重组蛋白纯化 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白透析复性 | 第31-32页 |
| ·SDS－PAGE 分析 | 第32页 |
| ·Western Blot 分析 | 第32-33页 |
| 3 试验结果 | 第33-41页 |
| ·重组质粒 PMD-S1 的构建 | 第33-35页 |
| ·目的基因的 RT-PCR 扩增 | 第33-34页 |
| ·重组质粒 PMD-S1 的筛选和鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组表达质粒 pET-S1 的构建 | 第35-37页 |
| ·带有粘性末端的表达载体 pET-32a(+)及目的基因的制备 | 第35-36页 |
| ·pET-S1 重组质粒的筛选和鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第37-41页 |
| ·诱导时间的优化 | 第37-38页 |
| ·IPTG 诱导浓度的优化 | 第38-39页 |
| ·重组蛋白表达形式的鉴定 | 第39页 |
| ·咪唑浓度优化 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第40页 |
| ·复性重组蛋白的 SDS-PAGE 分析 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白的 Western Blot 分析 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| ·S 蛋白的基因表达区域的选择 | 第41-42页 |
| ·表达系统的选择 | 第42页 |
| ·重组 S 蛋白的纯化与复性 | 第42-43页 |
| 第三章 重组蛋白间接 ELISA 方法的建立 | 第43-53页 |
| 1 材料 | 第43页 |
| ·试验材料 | 第43页 |
| ·溶液及试剂的配制 | 第43页 |
| 2 试验方法 | 第43-46页 |
| ·间接 ELISA 方法的操作步骤 | 第43-44页 |
| ·抗原包被浓度及血清稀释倍数的确定 | 第44页 |
| ·酶标二抗稀释度的确定 | 第44页 |
| ·封闭液的确定 | 第44页 |
| ·封闭时间的确定 | 第44-45页 |
| ·血清作用时间的确定 | 第45页 |
| ·酶标二抗作用时间的确定 | 第45页 |
| ·显色时间的确定 | 第45页 |
| ·间接 ELISA 阴、阳性血清临界值的确定 | 第45页 |
| ·特异性试验 | 第45页 |
| ·重复性试验 | 第45页 |
| ·临床样品的检测 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-52页 |
| ·抗原包被浓度及血清稀释倍数的确定 | 第46页 |
| ·酶标二抗稀释度的确定 | 第46-47页 |
| ·封闭液的确定 | 第47页 |
| ·封闭时间的确定 | 第47-48页 |
| ·血清作用时间的确定 | 第48页 |
| ·酶标二抗作用时间的确定 | 第48-49页 |
| ·显色时间的确定 | 第49-50页 |
| ·间接 ELISA 阴、阳性血清临界值的确定 | 第50-51页 |
| ·特异性试验 | 第51页 |
| ·重复性试验 | 第51页 |
| ·临床样品的检测 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| ·抗原的纯度对 ELISA 的影响 | 第52页 |
| ·抗原包被浓度的影响 | 第52页 |
| ·血清稀释倍数的影响 | 第52页 |
| ·封闭液对 ELISA 的影响 | 第52-53页 |
| 全文总结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59页 |